桑葉為桑科植物桑 ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ．的干燥葉，具 有疏散風(fēng)熱、清肺潤(rùn)燥、清肝明目的功效，用于治療 風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤昏花等。桑 葉中含有黃酮及黃酮苷類、生物堿類、多糖類等活性 成分。黃酮及黃酮苷類是桑葉的主要藥效成分，含 有蘆丁、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素等。現(xiàn)代藥理 研究表明，桑葉具有抗凝血、調(diào)血糖、調(diào)血脂、抗病毒 等功效。

１ 主要儀器與試劑 

１．１ 儀器

 超高效液相色譜系統(tǒng)，美國(guó)沃特世公司提供； ＬＣ－１５Ｃ島津高效液相色譜儀，日本島津公司提供； Ｐｉｌｏｔ５－８Ｌ真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有 限 公 司 提 供；ＴＢ－２１５Ｄ 萬 分 之 一 分 析 天 平、 ＢＳＡ２２４Ｓ－ＣＷ 十萬分之一分析天平，北京賽多利斯 有限公司提供；ＪＹ１０００１電子天平，上海民橋精密科 學(xué)儀器有限公司提供；ＫＱ－２５０型超聲波清洗器（功 率２５０ Ｗ，頻率４０ｋＨｚ），昆山市超聲儀器有限公司 提供；ＲＥ－３０００型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠 提供；ＢＪＨ－Ｗ２００Ｆ型陶瓷自動(dòng)中藥?kù)?，廣東天際電 器股份有限公司提供；梅特勒－托利多 ｐＨ 計(jì)，國(guó)際 貿(mào)易上海有限公司提供；一恒DHG-9123A 型電熱恒溫 鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科技有限公司提供。

１．２ 試劑 

新 綠 原 酸 （批 號(hào) 為 ＰＹ２０１７０２２０，純 度 為 ９９．７８％），咖 啡 酸 （批 號(hào) 為 １１０８８５－２００１０２，純 度 為 １００．００％），綠 原 酸 （批 號(hào) 為 ＰＹ２０１７０２１６，純 度 為 ９９．９６％），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；蘆丁 （批號(hào)為 ＭＵＳＴ－１６０３１８１３），購(gòu)自成都曼斯特生 物 科技有限公司；異槲皮苷（批號(hào)為１６０５２４０７）、紫云 英苷（批號(hào)為１５０７１２），均購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù) 有限公司；槲皮素－３－Ｏ－（６″－Ｏ－丙二?；拢模咸? 糖苷（批號(hào)為１７０９２４），購(gòu)自上海源葉生物技術(shù)有限 公司；色譜甲醇、色譜乙腈、色譜純磷酸，Ｆｉｓｈｅｒ化學(xué) 試劑公司提供；超純水，自制；其他試劑均為分析純。 １５批桑葉飲片均由神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司統(tǒng) 一采購(gòu)提供，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院孫寶惠主任 藥師鑒定為?？浦参锷?Ｍｏｒｕｓａｌｂａ Ｌ．的干燥葉， 飲片信息見表１。

２ 方法與結(jié)果

稱?。保蹬蔚纳Ｈ~飲片各約１００．０ｇ，煎煮２ 次。第一煎加１２倍量的水，浸泡３０ｍｉｎ，煮沸后煎 煮２０ｍｉｎ，用０．０７４μｍ（２００目）濾布趁熱濾過，將 濾液置于水浴中迅速冷卻；第二煎加１０倍量的水， 煮沸后煎煮２０ｍｉｎ，用０．０７４μｍ（２００目）濾布趁熱 濾過，將濾液置于水浴中迅速冷卻。合并濾液，減壓 濃縮（溫度為５０ ℃）成浸膏（投料量∶浸膏體積＝ １ｇ∶２ｍＬ）的，測(cè)定其ｐＨ 值、密度，冷凍干燥后，即 得物質(zhì)基準(zhǔn)干膏粉。按照式（１）計(jì)算出膏率，并測(cè)定 物質(zhì)基準(zhǔn)水分，見表２。分別精密稱取蘆丁對(duì)照品、異槲皮苷對(duì)照品和 紫云英苷對(duì)照品適量，加色譜甲醇溶解并定容，制成 每ｌｍＬ含蘆?。埃埃玻埃?ｍｇ、異槲皮苷０．０４５０ ｍｇ 和紫云英苷０．０１０２ｍｇ的混合對(duì)照品溶液。

３ 討 論 

３．１ 供試品溶液的制備

 由于桑葉物質(zhì)基準(zhǔn)在制備過程中標(biāo)志性成分已 被煮提出來，因此制備供試品溶液時(shí)采用超聲溶解 即可，對(duì)提取溶劑和超聲時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)合《中華 人民共和國(guó)藥典》２０１５年版桑葉項(xiàng)下供試品提取溶 劑為甲醇，故以５０％甲醇、７０％甲醇和甲醇作為提 取溶劑進(jìn)行考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以７０％甲醇為提取溶 劑時(shí)，各成分提取較為完全，故選用７０％甲醇作為 提取溶劑。選擇超聲時(shí)間為１０，２０，３０，４０ｍｉｎ對(duì)標(biāo) 志性成分提取率進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)超聲時(shí)間對(duì)桑葉物 質(zhì)基準(zhǔn)蘆丁、異槲皮苷、紫云英苷的提取率影響無差 別。為了節(jié)省時(shí)間，提高試驗(yàn)效率，故選擇１０ ｍｉｎ 進(jìn)行超聲提取。 

３．２ 色譜條件的確定

 依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》２０１５年版桑葉項(xiàng) 下含量測(cè)定色譜條件，采用甲醇－０．５％磷酸梯度洗 脫，發(fā)現(xiàn)蘆丁與異槲皮苷的色譜峰完全重合，二者極 性相近不易達(dá)到分離。經(jīng)過對(duì)色譜柱、流動(dòng)相比例 等進(jìn)行研究，最終發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相為乙腈－０．５％磷酸，采 用梯度洗脫時(shí)，二者的分離效果良好，且紫云英苷與 相鄰色譜峰也達(dá)到完全分離。依此確定了３種指標(biāo) 成分同時(shí)定量的液相色譜方法，并且在此流動(dòng)相基 礎(chǔ)上確定了 ＵＰＬＣ特征圖譜的色譜條件。

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