丹參是唇形科植物丹參( Salvia miltiorrhiza Bre．) 的干燥根及根莖，是我國(guó)一種傳統(tǒng)中藥材，應(yīng)用歷 史悠久，用途廣泛。據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，丹參主治 “心腹邪氣”，能夠“破癥除瘕，止煩滿，益氣”，《本草 綱目》記載丹參還具有“活血，通心包絡(luò)，治疝痛”等功效。

1 儀器與試藥

 1．1 儀器 

Acquity H-classUPLC( 美國(guó) Waters 公司) 包括低壓四元溶劑系統(tǒng)、自動(dòng)進(jìn)樣恒溫樣本管理器、光 電二極管矩陣檢測(cè)器、ACQUITY UPLC BEH C18色譜 柱( 2．1 mm×50 mm，1．7 μm) Empower3 色譜工作站; XS-106DU 電子分析天平( 瑞士梅特勒-托利多儀器公 司，感量: 0．01 mg) ; BL15-60AA 超聲波清洗機(jī)( 無(wú)錫沃信儀器制造有限公司) ; RE-52AAC 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 上海 亞榮生化儀器廠) ; YJ-100 中藥粉碎機(jī)( 濟(jì)南億健醫(yī)療 設(shè)備有限公司) ; DHG 鼓風(fēng)干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器 有限公司) ; DZF 真空干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限 公司) ; 調(diào)溫電熱器( 南通利豪實(shí)驗(yàn)儀器有限公司) 。 

1．2 試藥與試劑

 乙腈( 色譜純，美國(guó) Honeywell Burdick ﹠ Jackson 公司，批號(hào): S15A1H) ; 乙酸( 色譜純，美國(guó) TEDIA 公司，批號(hào): 17040594) ; 純化水( 杭州娃哈哈集團(tuán)有 限公司，批號(hào): 20180324) 。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ掌? 丹參素鈉 ( 批號(hào): 110855-201412，含量: 98．1%) 、原兒茶酸( 批號(hào): 110809-201205，含量: 99．9%) 、丹酚酸 B ( 批號(hào): 111562- 201716，含量: 94．1%) 、迷迭香酸( 批號(hào): 111871-201404，含 量: 90．5%) 購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院; 原兒茶醛 ［GBW09553，含量: ( 99．8±0．4) %) ］、咖啡酸［GBW09529， 含量: ( 99．5±0．7) %］、阿魏酸［GBW09518，含量: ( 99．8±0．5) %］、異阿魏酸［GBW09574，含量: ( 99．7±0．4) %］、 丹酚酸 A［含量: ( 99．1±0．4) %］購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 藥物 研 究 所; 9丹 酚 酸 B 單 甲 酯 ( 批 號(hào): MUST - 17060205，含量: 99．16%) 、9’丹酚酸 B 單甲酯( 批號(hào): MUST-171114055，含量: 99． 38%) 、丹酚酸 C ( 批號(hào): MUST- 17031402，含 量: 99． 90%) 、紫 草 酸 ( 批 號(hào): MUST-17053003，含量: 99．58%) 、丹酚酸 B 二甲酯( 批 號(hào): MUST-17041614，含量: 90．04%) 購(gòu)自成都曼斯特生 物科技有限公司。 不同批次的丹參樣品分別購(gòu)買自山東省萊蕪市艾 山、九龍、羅漢峪、密埠等地。經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物 研究所馬辰研究員鑒定為唇形 科 植 物 丹 參 Salvia miltiorrhizaBre．的干燥根及根莖。 

2 方法與結(jié)果 

2．1 色譜條件

 色譜柱: Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱( 2．1 mm×50 mm，1．7 μm) ; 柱溫 30 ℃ ; 進(jìn)樣 量: 1 μL; 檢測(cè)波長(zhǎng) 286 nm; 流動(dòng)相: 0． 5% 乙酸溶液 ( A) -乙腈( B) ，流速: 0． 6 mL·min－1 ，梯度洗脫: 0 ～ 1．02 min，90%→80% A; ＞1．02 ～ 4．08 min，80%→72% A; ＞4．08 ～ 4．76 min，72%→55% A; ＞ 4．76 ～ 5．50 min， 55%→90%A; ＞5．50～8 min，90%A。 

2．2 溶液的制備 

2．2．1 對(duì)照品溶液的制備 

分別稱取丹參素、原兒茶酸、 原兒茶醛、咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、 丹酚酸 B、丹酚酸 A、丹酚酸 C、9丹酚酸 B 單甲酯、9'丹酚 酸 B 單甲酯、丹酚酸 B 二甲酯約 10 mg，精密稱定，加入 80%甲醇溶液溶解并定容至 10 mL，得到濃度依次為 1．126，0．944，1．06，1．011，1．010，1．020，0．962，0．973，0．982， 0．968，0．996，1．049，1．067，0．904 mg·mL－1 的各對(duì)照品溶液 作為儲(chǔ)備液，其中原兒茶酸、丹酚酸 C、9丹酚酸 B 單甲 酯、9'丹酚酸 B 單甲酯、丹酚酸 B 二甲酯稀釋10 倍后作為 對(duì)照品溶液，其余 10 種成分將儲(chǔ)備液作為對(duì)照品溶液。 精密量取上述儲(chǔ)備液各 1 mL 至25 mL量瓶中，以 80%甲 醇溶液定容，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。

2．2．2 供試品溶液的制備

稱取樣品粉末［過(guò)三號(hào)篩 ( 50 目，孔徑 355 μm±13 μm) ］約 1 g，精密稱定，置于 250 mL 錐形瓶中，準(zhǔn)確加純化水 100 mL，加熱回流 4 h，冷卻過(guò)濾后將續(xù)濾液減壓濃縮，放冷，并定容至 25 mL，搖勻，即得。 

2．3 方法學(xué)驗(yàn)證 

2．3．1 專屬性實(shí)驗(yàn)

 取“2．2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液與供試品 溶液，按照“2．1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖 1。

 2．3．2 線性關(guān)系考察 

分別取“2．2．1”項(xiàng)下各儲(chǔ)備液 0．5，1．0，1．5，2．0，2．5 mL 至 50 mL 量瓶中，定容，搖勻，得到 5 份梯度濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2．1”中色譜 條件進(jìn)行分析，以各成分濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐 標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到 14 種水溶性成分的線性方程及 范圍，見(jiàn)表 1。

2．3．3 精密度實(shí)驗(yàn)

 取“2．2．1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按照 “2．1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6 次，測(cè)得峰面積，14 種 成分 RSD 值處于 0．19% ～ 1．81%，小于 2%，表明儀器 精密度良好。

 2．3．4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取上述“2．2．2”項(xiàng)下供試品溶液， 分別于 0，2，4，8，12，24 h 進(jìn)樣測(cè)定峰面積，14 種成分 在各時(shí)間點(diǎn)的峰面積的 RSD 值處于 0．57% ～ 0．51%， 小于 2%，證明供試品溶液穩(wěn)定性良好。 

2．3． 5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取樣品 2 ( 羅漢峪直徑 0． 1 ～ 0．5 cm的丹參藥材樣品) ，按照“2．2．2”項(xiàng)方法制備 6 份供試品溶液，按照“2．1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記 錄各成分峰面積，14 種成分平均含量 RSD 值處于 0．04% ～1．24%，小于 2%，表明方法重復(fù)性良好。

3 討論

測(cè)定丹參中水溶性成分的色譜條件中，流動(dòng)相的有機(jī)相多為乙 腈或者甲醇，非有機(jī)相多為乙酸溶液或磷酸溶液，柱溫 集中在 20～40 ℃，波長(zhǎng)范圍在 200 ～ 290 nm，為探求最 合適的色譜條件，筆者對(duì)流動(dòng)相( 甲醇-0．5%乙酸溶液、 乙腈-0． 5% 乙酸溶液、乙腈-0． 1% 磷酸溶液) 、波長(zhǎng) ( 210，254，286 nm) 、柱溫( 20，30，35 ℃ ) 進(jìn)行考察，當(dāng) 流動(dòng)相為甲醇-0．5%乙酸溶液時(shí)，所測(cè)成分間的分離度 較低，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-0．1% 磷酸溶液時(shí)，酸性較大的 成分( 如丹酚酸 A) 易產(chǎn)生拖尾，而流動(dòng)相為乙腈-0．5% 乙酸溶液時(shí)，峰形與分離度均較為理想; 當(dāng)波長(zhǎng)為 210 nm時(shí)，溶劑效應(yīng)顯著，當(dāng)待測(cè)成分含量較低時(shí)易被 溶劑峰掩蓋，而波長(zhǎng)為 254 nm 時(shí)，大部分成分的紫外 吸收值變小，有些成分響應(yīng)值甚至減小到 286 nm 下的 一半，所以選定波長(zhǎng)為 286 nm; 當(dāng)柱溫為 20 ℃時(shí)，色譜 峰出現(xiàn)前延，當(dāng)柱溫為 35 ℃時(shí)，出峰時(shí)間太短，分離度 欠佳，故最終選擇的柱溫為 30 ℃ ; 結(jié)合上述考察結(jié)果 最終確定當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-0．5%乙酸溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為 286 nm，柱溫 30 ℃時(shí)各成分的分離效果及峰形最好。

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