荷葉為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nuciferea Gaertn）的干 燥葉，來源廣泛，價格低廉，其含有生物堿、皂苷、黃酮類、 揮發(fā)油等復雜的化學成分。味苦、性平，歸肝、脾、胃經(jīng)，具 有清暑化濕、涼血止血的功效，抗氧化、抗病毒和降脂等 生物活性，藥食兩用，在荷葉入藥的制劑中，通常采用 薄層色譜法進行鑒別，試驗擬對中獸藥口服液中荷葉鑒別 進行質(zhì)量研究，制定產(chǎn)品質(zhì)量標準。

1 材料與方法 

1.1 主要試劑和儀器

 WFH-203B 型三用紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公 司）；薄層展開缸；一恒HWS-24 型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒 科學儀器有限公司）；AUW -120D 型 電 子 天 平 （日 本 島 津）；硅膠 G 薄層板分別購于青島海洋化工有限公司、煙臺德信生物和德國默克公司；氯仿、丙酮、濃氨等分析純試 劑購于廣州市化學試劑廠；純凈水，購于屈臣氏；荷葉對照 藥材：批號：121322-200402，購于中國食品藥品檢定研究 院；中獸藥口服液供試品，實驗室自行研制產(chǎn)品，由荷葉、 甘草等 8 味藥材經(jīng)過一定的工藝制備而成。 

1.2 方法 

1.2.1 薄層色譜方法比較

 方法 1：供試品溶液制備：取供 試品 30 mL，置分液漏斗中，加氨水 10 mL，加三氯甲烷提 取 2 次，每次 40 mL，振搖提取，水浴加熱，分取三氯甲烷 層，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘渣加乙醇 1 mL 溶解， 作為供試品溶液。對照藥材溶液制備：取荷葉對照藥材 1 g， 加水 100 mL，煎煮 2 次，每次 30 min，合并水提液，濃縮至 約 30 mL，照供試品同法制備，作為對照藥材溶液。陰性樣 品溶液制備：取除荷葉的其余藥材，經(jīng)加工制備成缺荷葉 的陰性樣品，按“供試品溶液制備”方法制備成陰性樣品溶 液。照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和陰性 樣品溶液各 10 μL，分別點于同一硅膠 G 薄層板上，以氯 仿-乙酸乙酯-甲醇-水 （3∶4∶2∶1）10 ℃以下放置的下層溶 液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘鉍鉀試液。 方法 2：供試品溶液制備：取本品 10 mL，加甲醇 30 mL， 水浴回流 30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水 25 mL溶解，用 10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 值至 10，加乙醚 30 mL 振搖提取，分取乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇 1 mL 溶解，作 為供試品溶液。對照藥材溶液和陰性樣品溶液制備同方法 1。照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和陰性樣 品溶液各 10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘和劑 的硅膠 G 薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液（9∶1∶0.2）為展 開劑，展開，取出，晾干。置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰。 方法 3：溶液制備同方法 2。照薄層色譜法，吸取供試 品溶液、對照藥材溶液和陰性樣品溶液各 10 μL，分別點 于同一硅膠 G 薄層板上，以氯仿-丙酮-濃氨試液（6∶2∶0.1）為 展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（365 nm）下檢視。 

1.2.2 耐用性試驗 

考察不同溫度、濕度、時間條件下以 及使用不同品牌 G 薄層板，薄層色譜圖的穩(wěn)定性。供試品 溶液、對照藥材溶液和陰性樣品溶液制備同“1.2.1”。照薄 層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和陰性樣品溶 液各 10 μL，分別點于同一硅膠 G 薄層板上，以氯仿-丙 酮-濃氨試液（6∶2∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫 外光燈（365 nm）下檢視。

2 結果

以室內(nèi)溫度 為 25 ℃，室內(nèi)濕度為 50%。供試品溶液與對照藥材溶液配 制好后在 0 h 分別在廠家 1、廠家 2、廠家 3 硅膠 G 薄層 板點樣，結果表明，使用不同廠家的硅膠 G 薄層板，對照 品溶液和供試品溶液斑點展開效果好，Rf 值適中，主斑點 清晰，無顯著性影響。實驗結果表明，在 0 h、8 h、24 h 不同時間 點樣，對照品溶液和供試品溶液斑點展開效果好，Rf 值適 中，主斑點清晰，無顯著性影響，說明制定的方法在配制好 的樣品在 24 h 內(nèi)點樣，不影響結果。以青島海洋化工 制造的硅膠 G 薄層板為固定相，室內(nèi)濕度為 50%，供試品 溶液與對照品溶液配制好后在 0 h 點樣，分別在室溫 25 ℃、 室溫 30 ℃、冰箱 4 ℃進行展開，結果表明，對照品溶液和 供試品溶液斑點展開效果好，Rf 值適中，主斑點清晰，無 顯著性影響。

3 討論 

關于荷葉薄層色譜鑒別的研究相對較少，《中 華 人 民共和國獸藥典》2015 年版荷葉項下無荷葉薄層色譜鑒別，《中華人民共和國藥典》2015 年版荷丹片和荷葉丸均 以荷葉堿作為對照品進行薄層色譜鑒別。試驗參考阮時 寶等和田宏等建立的中藥制劑中荷葉薄層色譜鑒別方 法，對研制的中獸藥口服液中的荷葉進行質(zhì)量研究。試驗 結果顯示，制定的薄層色譜鑒別方法清晰可見，分離度好 且陰性無干擾，穩(wěn)定性好，對荷葉項能進行較好的質(zhì)量控制。

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