穿心蓮來源于爵床科植物穿心蓮[Andrographis paniculata（Burm. f.）Nees]，以地上部分入藥；其味苦，性 寒，具有清熱解毒、涼血、消腫等功效，臨床上用于治療 感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、頓咳勞嗽、泄瀉痢疾、熱 淋澀痛、癰腫瘡瘍、蛇蟲咬傷等。穿心蓮的臨床應用范 圍廣，現代藥理研究顯示其在心血管系統疾病、呼吸 系統疾病、胃腸道系統等疾病領域均有廣泛的應用前景 。穿心蓮以種子繁殖，其種子細小、表面有蠟質層， 種皮較堅硬、透性差，需在溫暖濕潤的條件下才能萌發(fā)。

1 材料

1.1 儀器

THZ-100B 型恒溫培養(yǎng)搖床（上海一恒科學儀器有 限公司）；QF-PRX-160型智能人工氣候箱（上海喬楓實 業(yè)有限公司）；GXX-9023MBE型電熱鼓風干燥箱（上海 博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）；JJ300型電子天平（廣 州湘儀機電設備有限公司）；Basic-Q15 型純水機（上海 和泰儀器有限公司）。

1.2 試劑

次氯酸鈉（廣州化學試劑廠，批號：20170912）；乙醇（分析純，廣州化學試劑廠，批號：20180606）；聚乙二醇 6000（PEG-6000，天津市致遠化學試劑有限公司，批號： 20171034）；氯 化 鈉（NaCl，廣 州 化 學 試 劑 廠 ，批 號 ： 20170803-2）；水為超純水。

1.3 菌種

費 氏 中 華 根 瘤 菌（Sinorhizobium fredii，編 號 ： GIM1.227）、放射型根瘤菌（Rhizobium radiobacter，編 號：GIM1.757）購自廣東省微生物保藏中心；田菁莖瘤固 氮根瘤菌（Azorhizobium caulinodans，編號：ORS571）由 西北農林科技大學劉華偉副教授提供。

1.4 種子

穿心蓮種子產自廣西省玉林市興業(yè)縣，經廣州中醫(yī) 藥大學藥用植物學教研室杜勤教授鑒定為爵床科植物 穿心蓮[A. paniculata（Burm. f.）Nees]的成熟種子。

2 方法

2.1 干旱脅迫模型的建立

選取籽粒飽滿健壯、大小均勻的穿心蓮種子，以 75％乙醇消毒 30 s 后，以 12％次氯酸鈉溶液消毒 12 min，并以無菌水沖洗4～5次。參考車代弟等的研究 方 法 ，分 別 以 0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 g/mL 的 PEG-6000（以下簡稱“PEG”）溶液為處理液浸泡穿心蓮 種子，模擬干旱脅迫條件；另設以無菌水為處理液浸泡 的種子作為對照組。采用培養(yǎng)皿紙上發(fā)芽法萌發(fā)種子： 選用直徑為 9 cm 的培養(yǎng)皿，在培養(yǎng)皿底部放置 2 層紗 布、1層濾紙，按照不同的處理方法分組，加入相應處理 液6 mL使紗布和濾紙吸液至飽和，在每個培養(yǎng)皿中整 齊擺放50粒種子。將培養(yǎng)皿和種子一起稱定質量，然后置于溫度28 ℃、濕度60％、12 h明/暗交替的人工氣候箱 中培養(yǎng)，每隔12 h加水至原質量。每隔24 h對萌芽的種 子進行1次計數，直至連續(xù)2 d無新萌發(fā)種子為止。發(fā)芽 試驗結束后，以直尺測量種子的胚根和胚軸長度，并計 算種子各項萌發(fā)指標（下同） ：發(fā)芽率（％）＝發(fā)芽試驗 結束時正常發(fā)芽的種子數/供試種子數×100％；發(fā)芽勢 （％）＝3 d后正常發(fā)芽的種子數/供試種子數×100％；發(fā) 芽指數＝浸種一定天數時的發(fā)芽數/相應的發(fā)芽天數；活 力指數＝發(fā)芽指數×（萌發(fā)胚根長度+胚軸長度）。上述 試驗重復3次。

2.2 鹽脅迫模型的建立

選取籽粒飽滿健壯、大小均勻的穿心蓮種子，按 “2.1”項下方法進行消毒和水洗。參考孫元新等的研 究方法，分別以50、100、150、200 mmol/L的NaCl溶液為 處理液浸泡穿心蓮種子，以模擬鹽脅迫條件；另設以無 菌水為處理液浸泡的種子作為對照組。按“2.1”項下培 養(yǎng)皿紙上發(fā)芽法，分別采用相應的處理液進行處理后進 行種子發(fā)芽試驗，并在試驗結束后計算種子各項萌發(fā)指 標。上述試驗重復3次。

2.3 解除脅迫試驗

采用解除脅迫試驗考察不同根瘤菌對干旱脅迫、鹽 脅迫條件下穿心蓮種子萌發(fā)的影響。選取籽粒飽滿健 壯、大小均勻的穿心蓮種子，按“2.1”項下方法進行消毒 和水洗。然后將供試種子按250粒/瓶分別置于無菌培 養(yǎng)瓶中，共4瓶。取生長至對數期的費氏中華根瘤菌、放 射型根瘤菌和田菁莖瘤固氮根瘤菌，用無菌水稀釋制成 1.0×107 個/mL的菌液后，分別按20 mL/瓶加至上述3個 培養(yǎng)瓶中，浸種24 h；第4個培養(yǎng)瓶加入等量無菌水，同 法處理，作為對照組。

3 結果

與對照組比較，采用0.05～0.25 g/mL PEG處理后， 均可顯著降低穿心蓮種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和活力指 數，0.10、0.20、0.25 g/mL PEG處理可顯著降低其發(fā)芽指 數（P＜0.05）；其中，采用0.20、0.25 g/mL PEG處理后，穿 心蓮種子各項萌發(fā)指標降低幅度較大。與PEG對照組比較，費氏中華根瘤菌處理可顯著提 高干旱脅迫條件下穿心蓮種子各項萌發(fā)指標（P＜ 0.05），使發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數、活力指數分別提高 了46.02％、399.57％、69.09％、11.23％；放射型根瘤菌處 理可顯著提高穿心蓮種子各項萌發(fā)指標（P＜0.05），使 發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數、活力指數分別提高了 22.02％、14.13％、29.61％、25.20％；田菁莖瘤固氮根瘤 菌處理可顯著提高穿心蓮種子的發(fā)芽率、發(fā)芽指數和活 力指數（P＜0.05），使上述指標分別提高了 28.02％、 33.51％、28.64％，而對其發(fā)芽勢的影響無統計學意義 （P＞0.05）。

4 討論

廣東地區(qū)年平均春旱時間長，干旱發(fā)生率高，而 穿心蓮喜溫暖、濕潤、向陽，且怕旱、怕寒，其播種期為每 年 3～5 月，正處于廣東的春旱時節(jié)。此外，近年來 人均耕地面積的減少和土地質量的下降，使得土壤鹽漬 化嚴重。而廣東省全省灘涂土壤面積約 844.7 萬畝， 主要分布在靜水海灣和河流入海處，面積廣闊，具較大的種植開拓潛力。因此，開展穿心蓮種子的抗干旱脅 迫、抗鹽脅迫對于該省發(fā)展穿心蓮的播種、栽培和規(guī)模 化生產具有重要的實踐意義。



 

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