1 材料與方法

LＲH － 250 型生化培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn); DHZ － DA 型水平搖床，江蘇 太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠產(chǎn); PHS － 3C 型 pH 計(jì)，上海 儀電科學(xué)儀器股份有限公司產(chǎn); 752N 型紫外分 光光 度 計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司 產(chǎn); SMAＲT 型顯微鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限公司 產(chǎn); 5427Ｒ 型高速低溫離心機(jī)，德國(guó) Eppendorf 公司產(chǎn)．

2 結(jié)果與分析

在易錯(cuò) PCＲ 反應(yīng)體系中，調(diào)整 dNTP 的比例， 使 dCTP、dTTP 的濃度增大到 1 mmol/L，以促進(jìn)堿 基錯(cuò)配的傾向性． 此外，在易錯(cuò) PCＲ 反應(yīng)體系中分 別加入濃度梯度為 0 mmol/L，0． 01 mmol/L， 0． 05 mmol /L，0． 10 mmol /L，0． 15 mmol /L， 0． 20 mmol /L 的 MnCl2，以得到不同突變頻率的 文庫(kù)． 用不同 Mn2 + 濃度的易錯(cuò) PCＲ 擴(kuò)增產(chǎn)物 構(gòu)建表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5α 感受 態(tài)細(xì)胞，從突變文庫(kù)中的每個(gè) Mn2 + 濃度中隨機(jī) 挑取 10—20 個(gè)克隆子進(jìn)行菌落 PCＲ，檢測(cè)其陽 性轉(zhuǎn)化率; 再?gòu)闹懈魈暨x 3 個(gè)陽性克隆子進(jìn)行 測(cè)序． 在易錯(cuò) PCＲ 突變文庫(kù)的建立中，要考慮 的重要因素是突變頻率的控制，一般來說，突變 基因控制在 1—5 個(gè)堿基，對(duì)應(yīng)的氨基酸突變數(shù) 為 1． 0 ～ 2． 0 個(gè)比較合理

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