冠心蘇合丸和冠心蘇合膠囊均由蘇合香、冰片、醋 乳香、檀香和土木香制成，具有理氣、寬胸、止痛的功 效，用于寒凝氣滯、心脈不通所致的胸痹，癥見胸悶、心 前區(qū)疼痛; 冠心病心絞痛見上述證候者。二者均為 口服給藥制劑，按照 2015 年版《中國藥典》四部非無 菌藥品微生物限度標準規(guī)定，應(yīng)對需氧菌總數(shù)、霉菌和 酵母菌總數(shù)、大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭陰性菌和沙門菌 等 5 項微生物指標加以控制。由于其處方中冰片、 乳香和蘇合香都有抗菌消炎的作用，故進行微生 物限度檢查時，應(yīng)消除樣品的抑菌活性，建立一種可靠 有效的，適用于本品的方法。

1 儀器與試劑

1． 1 儀器

全自動微生物分析系統(tǒng)( Vitek 2 compact，生物梅 里埃) ; 生物安全柜( BHC － 1000ΙΙA/B3，蘇凈集團安 泰公司) ; 隔水式恒溫培養(yǎng)箱( 一恒GHP-9270，上海一恒 科學儀器有限公司) ; 生化培養(yǎng)箱( LRH － 250，上海一 恒科學 儀 器 有 限 公 司) ; 高 壓 滅 菌 鍋 ( HVA － 110， HIRAYAMA) ; 微量移液槍( BRAND) 等。

1． 2 菌種

大腸埃希菌［CMCC( B) 44102］、金黃色葡萄球菌 ［CMCC ( B ) 26003 ］、枯 草 芽 孢 桿 菌 ［CMCC ( B ) 631001］、銅綠假單胞菌［CMCC( B) 10104］、乙型副傷 寒沙門菌［CMCC( B) 50094］、白色念珠菌［CMCC( F) 98001］和黑曲霉［CMCC( F) 98003］均來源于中國藥品 生物制品檢定所，以上菌種均為第 4 代培養(yǎng)物。

1． 3 培養(yǎng)基

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基( 批號: 160912) 、胰酪大 豆胨瓊脂培養(yǎng)基( 批號: 170321) 、沙氏葡萄糖液體培 養(yǎng)基( 批號: 150914) 、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基( 批號: 1705042) 、麥康凱液體培養(yǎng)基( 批號: 160801) 、麥康凱 瓊脂培養(yǎng)基( 批號: 1608303) 、RV 沙門增菌液體培養(yǎng) 基( 批 號: 151012 ) 、腸道增菌液體培養(yǎng)基 ( 批 號: 1702162) 、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ( 批 號: 1702142) 、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基( 批號: 171011) 和 pH 值 7． 0 無菌氯化鈉 － 蛋白胨緩沖液( 批 號: 161130) 均來自于北京三藥科技開發(fā)公司。

1． 4 樣品

冠心蘇合膠囊( 批號: 171004，河北萬歲藥業(yè)有限公司) ; 冠心蘇合丸( 批號: 1706137，哈藥集團世一堂 制藥廠) 。

2 方法與結(jié)果

2． 1 菌液制備

按照2015 年版《中國藥典》制備上述菌種的菌懸液。

2． 2 供試液制備

取樣品 10 g，加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 90 mL， 45 ℃水浴保溫，用勻漿儀混勻，得 1 ∶ 10 供試液，再 10 倍梯度稀釋得 1∶ 100 和 1∶ 1 000 供試液。

2． 3 計數(shù)方法適用性試驗

2． 3． 1 試驗組

平皿法: 取 1∶ 10、1∶ 100 和 1∶ 1 000 供試液 10 mL 至試管中，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、 枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉，使每毫升供試液 含菌量不大于 100 cfu。取菌懸液 1 mL 至平皿，平行 制備 2 個平皿，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)計 數(shù)。再從接種白色念珠菌和黑曲霉的供試液試管中， 取懸液 1 mL 至平皿，平行制備 2 個平皿，傾注沙氏葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)計數(shù)。 薄膜過濾法: 取供試液 1 mL，按薄膜過濾法過濾， 用 0． 1% 蛋白胨水溶液沖洗 3 次，每次 100 mL。在最 后一次沖洗液中分別加入小于 100 cfu /mL 的 5 種菌 懸液，過濾。將過濾后的濾膜貼于瓊脂培養(yǎng)基平板表 面，培養(yǎng)計數(shù)。

2． 3． 2 供試品組

除不加試驗菌外，其他同試驗組。

2． 3． 3 菌液組

分別取上述 5 種試驗菌懸液 1 mL 至平皿中，平行 制備 2 個平皿，傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)計數(shù)。

2． 3． 4 回收率計算

冠心蘇合膠囊計數(shù)方法適用性試驗回收率見 表 1，冠心蘇合丸計數(shù)方法適用性試驗回收率。 回收率( % ) = ( 試驗組菌落數(shù) － 供試品組菌落 數(shù)) /菌液組菌落數(shù) × 100%

2． 4 控制菌檢查方法適用性試驗

試 驗 組: 取 1 ∶ 10 供 試 液 10 mL 及 不 超 過 100 cfu /mL的大腸埃希菌懸液 1 mL 加入到 100 mL 的 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，33 ℃培養(yǎng)24 h。吸取1 mL 培養(yǎng)物接種至 100 mL 麥康凱液體培養(yǎng)基中，43 ℃ 培 養(yǎng) 24 h。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂 培養(yǎng)基平板上，33 ℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察是否有菌生長。 挑取單菌落分離純化，經(jīng)革蘭染色后用 Vitek 2 compact 進行生化鑒定。

3 討論

冠心蘇合膠囊和冠心蘇合丸對細菌具有一定的抑 制作用，由于二者的處方一致，其抑菌作用沒有顯 著差異。在需氧菌計數(shù)方法試驗中，二者 1∶ 10 供試液 對革蘭陰性菌如銅綠假單胞菌基本沒有抑制作用，但 對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌抑制作用較強。當 供試液稀釋至 1∶ 100 和 1∶ 1 000 時，仍對枯草芽孢桿 菌有較強的抑制作用。使用薄膜過濾法處理時，1∶ 10 供試液黏稠度較高，藥渣較多，難以通過濾膜，而1∶ 100 供試液仍有較多的藥渣殘留在薄膜上，枯草芽孢桿菌 的回收率仍不能達到 50% ，最后選用 1∶ 1 000 供試液 采用薄膜過濾法才能消除樣品的抑菌活性，5 種菌的 回收率均超過 50% 。而在霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)以 及控制菌檢查試驗中，常規(guī)法既可達到要求。



 

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