氧氟沙星為第 3 代喹諾酮類抗菌藥物，對需氧革蘭 陰性桿菌、腸桿菌科、假單胞菌屬、支原體、衣原體、非典 型分枝桿菌等均有良好的抗菌活性，尤其對需氧革蘭陰 性桿菌的抗菌活性最強(qiáng)。對氧氟沙星膠囊進(jìn)行微生物限 度檢查時(shí)，需要消除樣品的抑菌活性，真實(shí)地反映其微 生物污染情況，防止出現(xiàn)假陰性檢查結(jié)果。

菌種 : 金 黃 色 葡 萄 球 菌 ( Staphylococcus aureus) [CMCC( B) 26003 ]、銅綠假單胞菌( Pseudomonas aeruginosa) [CMCC( B) 10104]、枯 草 芽 孢 桿 菌 ( Bacillus subtilis) [CMCC( B) 63501 ]，白色念珠菌( Candida albicans) [CMCC( F) 98001]、黑曲霉( Aspergillus niger) [CMCC( F) 98003]，大 腸 埃 希 菌 ( Escherichia coli) [CMCC( B) 44102]，均購自中國食品藥品檢定研究院，工作用菌株 均為第 3 代。

儀器: LDZX － 30KBS 型壓力蒸汽滅菌器( 上海申安 醫(yī)療器械廠) ; XY500JC 型電子天平( 常州市幸運(yùn)電子設(shè) 備有限公司) ; HFsafe － 1800TE ⅡB2 型生物安全柜( 上 海力申科學(xué)儀器有限公司) ; BSD － TX345 型臺(tái)式恒溫 振蕩器( 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司) ; HH － 系列電熱恒溫 水浴鍋( 北京科偉永興儀器有限公司) ; LRH － 250F 型 生化培養(yǎng)箱、MJ-250F型霉菌培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀 器有限公司); FC752 型薄膜過濾器( 杭州泰林生物技術(shù) 設(shè)備有限公司，批號為 20160102) 。 試藥: 氧氟沙星膠囊( 某制藥公司，批號為 150801， 規(guī)格為每粒 0． 1 g) ; 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基( 批號為151107) 、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基( 批 號 為 150824) 、 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基( 批號為 151114) 、沙氏葡萄糖 液體培養(yǎng)基( 批號為 1505252) 、蛋白胨培養(yǎng)基( 批號為 160119) 、麥康凱液體培養(yǎng)基( 批號為 150911) 、麥康凱 瓊脂培養(yǎng)基( 批號為 1504162) ，均購自北京三藥科技開 發(fā)公司; 氯化鈉( 天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號為 20160601) ; 氯化鎂( 天津市百世化工有限公司，批號為 20150103) 。

將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、 大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種于胰酪大豆胨液體 培養(yǎng)基中，35 ℃ 培養(yǎng) 24 h; 將白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物 接種于沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，25 ℃ 培養(yǎng) 3 d。上述 培養(yǎng)物用無菌 0． 9% 氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸 液; 將黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基上，25 ℃ 培養(yǎng) 7 d 或直至獲得豐富的孢子，加入 5 mL 含 0． 05% 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯化鈉溶液，洗脫 孢子，收集孢子懸液，用含 0． 05% 聚山梨酯 80 的無菌 0． 9% 氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。

取 供 試 品 10 g，加 含 5% 聚 山 梨 酯 80 的 胰 酪 大 豆胨液體培養(yǎng)基至 100 mL，45 ℃恒溫振蕩 15 min，制成 1 ∶ 10 ( m / V ) 的供試液 A。取供試品 10 g，加含 5% 聚 山梨酯 80 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至 90 mL，再加入 10 mL 1 mol / L 的氯化鎂溶液，45 ℃ 恒溫振蕩 15 min， 制成 1 ∶ 10 ( m / V)的供試液 B。

需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法: 采用薄膜過濾法。試驗(yàn)組，取 2． 2 項(xiàng)下供試液 A、供試液 B 各 1 mL，置含 100 mL 1% 聚山梨酯 80 的 0． 1% 蛋白胨水溶液的薄膜過濾器中， 濾過，用含 1% 聚山梨酯 80 的 0． 1% 蛋白胨水溶液分別 試驗(yàn)沖洗 5 次、8 次，每次 100 mL。在最后一次沖洗液中 分別加入菌落數(shù)不超過 100 cfu / mL 的金黃色葡萄球 菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉 試驗(yàn)菌液各 1 mL。制備好的濾膜，菌面朝上，貼于胰酪 大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上。供試品對照組，取制備好的 供試液，以稀釋液代替菌液，同試驗(yàn)組操作。菌液對照 組，取不含中和劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液，按試驗(yàn)組 方法操作。中和劑對照組，取相應(yīng)量稀釋液替代供試品， 同試驗(yàn)組方法操作。各組每株菌平行制備 2 皿，30 ～ 35 ℃ 培養(yǎng) 2 ～ 3 d。計(jì)算平均菌落數(shù)。霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法: 采用平皿法。試驗(yàn)組，取 2． 2 項(xiàng)下供試液 A 分裝于 2 個(gè)無菌試管中，每管裝量 9． 9 mL，再分別加入制備好的含菌量不大于 104 cfu / mL的白色念珠菌、黑曲霉試驗(yàn)菌液各 0． 1 mL。取制備好的 試驗(yàn)組樣品液 1 mL，置直徑為 90 mm 的無菌平皿中，注 入溫度不超過 45 ℃ 熔化的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基約 20 mL，混勻，凝固，每株菌平行制備 2 皿，20 ～ 25 ℃ 培 養(yǎng) 3 ～ 5 d。同法測定供試品對照組、菌液對照組及中和 劑對照組，并計(jì)算各組的平均菌落數(shù)。

氧氟沙星膠囊對霉菌和酵母菌抑制作用較弱，因此 霉菌和酵母菌總數(shù)采用常規(guī)平皿法即可。在預(yù)試驗(yàn)中， 需氧菌以常規(guī)法試驗(yàn)，供試液稀釋到 1 ∶ 100( m / V) 時(shí)， 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的回收 比值皆為 0。由此可見，氧氟沙星膠囊對細(xì)菌有很強(qiáng)的 抑菌活性，遂在薄膜過濾法過程中采用了最后一次沖洗 時(shí)加入試驗(yàn)菌的方法，并取制備的 1 ∶ 10 供試液 1 mL 或 10 mL 加入含 100 mL 沖洗液濾器中，混勻后過濾，可有效防止藥物顆粒堵塞薄膜。在中和劑的選擇上，第一， 氧氟沙星膠囊有較強(qiáng)的抑菌活性，首選添加聚山梨酯80，因?yàn)橐欢舛鹊木凵嚼骢?80 能促進(jìn)膠囊劑的乳化 與分散，并對抑菌活性有中和作用; 第二，氧氟沙星膠囊 為喹諾酮類抗菌藥物，可與金屬離子( Ca2 +，Mg2 +，F(xiàn)e3 +， Al 3 + ) 發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，使抗菌活性下降。



 

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