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分析大腸埃希菌的表型特征探討

返回列表 來(lái)源:未知 發(fā)布日期:2019-08-28 10:01【

致瀉性大 腸 埃 希 菌 包 括 產(chǎn) 志 賀 毒 素 大 腸 埃 希 菌 (STEC),侵 襲 性 大 腸 埃 希 菌(EIEC),產(chǎn) 腸 毒 素 大 腸 埃希菌(ETEC),腸致病性大腸埃希菌(EPEC)和腸聚 集性大腸埃 希 菌(EAEC)。其 中,STEC 能 導(dǎo) 致 血 性 腹瀉、出血性腸 炎,甚 至 嚴(yán) 重 的 溶 血 性 尿 毒 癥 綜 合 征 (HUS),國(guó) 內(nèi) 外 已 有 報(bào) 道。



1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基


哥倫比亞血平板、麥康凱平板、山梨 醇麥康凱平板購(gòu)自廣州市迪景微生物科技有限公司, 大腸埃希菌 O157顯色平板購(gòu)自法國(guó)科瑪嘉公司。診 斷血清:大腸埃希菌診斷血清購(gòu)自丹麥國(guó)家血清研究 院。OK O Pool1 血 清 (內(nèi) 含 O157 血 清 型)批 號(hào): P1Q1-2H1,有效期2021-07-30;O157單價(jià)血清批號(hào): O157K1-1H2,效 期 2020-01-03;H7 單 價(jià) 血 清 批 號(hào):H7E1-H15,效期至2021-06-06,均在有效期內(nèi)。



1.1.2 生化管

MUG 和山梨醇生 化 管 購(gòu) 自 杭 州 濱 河微生物試劑有限公司,均在有效期內(nèi)。



1.1.3 試驗(yàn)菌株

大 腸 埃 希 菌 O157:H7(ATCC 43888)、大腸 埃 希 菌 O157:H7(NCTC12900)、大 腸 埃希菌 O157:H7(衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)菌株1708)3株標(biāo) 準(zhǔn)菌株 以 及 大 腸 埃 希 菌 ATCC25922、EIEC O143、 ETEC、EPECO111、EAEC 各1株,均為本室 收 藏 質(zhì) 控菌株。



1.1.4 臨床菌株

2018年4月至2019年2月廣州 市花都區(qū)餐飲從業(yè)人員糞便(肛 拭 子)中 隨 機(jī) 檢 出 的 大腸埃希菌357株。



1.2 儀器與 試 劑

ATB 半 自 動(dòng) 微 生 物 儀 及32E 鑒 定條和吲哚試劑、VITEK2-compact全自動(dòng)微生物儀 及革蘭陰性菌鑒定卡(GN 卡),法國(guó)生物梅里埃公司 生產(chǎn),鑒定條、鑒定卡及試劑均在有效期內(nèi)。基 質(zhì) 輔 助激光解 吸-飛 行 時(shí) 間 質(zhì) 譜 儀(VITEK MS),法 國(guó) 梅 里埃公司生 產(chǎn)。DHP-9052電熱恒溫培養(yǎng)箱,上 海 一 恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。ZF-80型暗箱四用紫外線 分析儀,上海嘉鵬科技有限公司生產(chǎn)。



1.3 方法

通過(guò)實(shí)驗(yàn)菌株的菌落特征、MUG 和山梨 醇發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果以及自動(dòng)化儀器鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)鑒定大腸埃希菌 O157:H7,找出該菌的鑒定特征。用哥 倫比 亞 血 平 板 復(fù) 蘇 大 腸 埃 希 菌 O157:H7、ATCC 25922、EIEC O143、ETEC、EPEC O111、EAEC 六 種 菌,同時(shí) 接 種 MUG 和山梨醇生化管,并 劃 線 接 種 麥 康凱平板、山梨醇麥康凱平板、大腸埃希菌 O157顯色 平板觀察菌落特征,并做玻片法血清學(xué)凝集試驗(yàn)。健 康體檢人員的糞便拭子劃線接種山梨醇麥康凱平板, 35℃孵育18~24h,挑選無(wú)色透明(山梨醇陰性)、紅 色(山梨醇陽(yáng)性)菌落轉(zhuǎn)種哥倫比亞血平板經(jīng)35 ℃孵 育18~24h,取 革 蘭 陰 性、氧化酶陰性的培養(yǎng)物,用 ATB進(jìn)行生化鑒定,鑒定出的大腸埃希菌(選擇好的 或者極好的 鑒 定 菌 株)接 種 MUG 和山梨醇生化管。 對(duì) MUG 陰性或 山 梨 醇 陰 性 以 及2項(xiàng)試驗(yàn)均陰性的 大腸埃希菌劃 線 接 種 麥 康 凱 平 板、大 腸 埃 希 菌 O157 顯色平板,觀察菌落特征并做玻片法血清凝集試驗(yàn)。



2 結(jié)  果

質(zhì)控菌 株 的 MUG 和山梨醇以及血清學(xué)試驗(yàn)質(zhì) 量控制合格,3株大腸埃希菌 O157:H7的 MUG 和山 梨醇均陰性、與 大 腸 埃 希 菌 O157多 價(jià)、O157單 價(jià) 及H7單 價(jià) 血 清 凝 集。其他的大腸埃希 菌結(jié)果明確。 MUG 和山梨醇試驗(yàn)及大腸埃希菌 O157:H7血 清 學(xué) 試驗(yàn)的質(zhì)量 控 制 結(jié) 果 如 下。MUG(+)山 梨 醇(+): 大腸埃 希 菌 ATCC25922;MUG(-)山 梨 醇(-)為 O157:H7 ATCC 43888、O157:H7 NCTC 12900、 O157:H7衛(wèi)生部質(zhì)評(píng)菌1807;O157:H7血清學(xué)(+) 為 O157:H7ATCC43888、O157:H7NCTC12900、 O157:H7衛(wèi)生部質(zhì)評(píng)菌1807;O157:H7血清學(xué)(-) 為大腸埃希菌 ATCC25922。 三株大腸埃希菌 O157:H7的 MUG 和山梨醇試 驗(yàn)均陰性;EPECO111的 MUG 陽(yáng)性,山梨醇陰性;其 他的菌株2項(xiàng)試驗(yàn)均陽(yáng)性,見(jiàn)圖2,圖3;山 梨 醇 試 驗(yàn)結(jié)果與山梨醇麥康凱平板菌落特征吻合。



3 討  論   

大 腸 埃 希 菌 O157:H7的 MUG 陰 性,山梨醇陰性,有兩個(gè)血清型,85%為 O157:H7(有動(dòng) 力), 12%為 O157:HNM(無(wú) 動(dòng) 力),3% 是 H7 以 外 的 H 型。由于臨床微生物室通常不將其作為目的菌,且此 菌在麥康凱平板上是紅色菌落,可能作為非致病菌排 除。 來(lái)自糞便中的357株大腸埃希菌,未檢出 O157: H7,可 能 與 健 康 人 群 帶 菌 率 低 有 關(guān)。 雖 然,根 據(jù) MUG 或山梨醇 單 一 試 驗(yàn) 可 以 篩 查 O157,但 有 較 高的假陽(yáng)性,因 MUG 和山梨醇均陰性的大腸埃希菌 只有2.2%,故選擇“雙陰”菌株作進(jìn)一步鑒定,特別在 大批量標(biāo)本篩查時(shí)省時(shí)省力、且節(jié)省血清。



 


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