葛仙米（Nostoc sphaeroides Kützing）是藍(lán)藻門念珠 藻科的一種低等單細(xì)胞藍(lán)藻，古名天仙菜、天仙米，俗 稱水木耳。據(jù)《綱目拾遺》記載，葛仙米“性寒，味甘 爽”，具有“解熱，清膈，利腸胃”的功效?，F(xiàn)代關(guān)于葛 仙米的研究包括基礎(chǔ)物質(zhì)、藥理活性以及提取工 藝。通過對這些研究報(bào)道分析，葛仙米多糖以其含量最高、活性最強(qiáng)及研究報(bào)道最為詳盡為葛仙米中最 重要的成分。而對葛仙米多糖的研究，提取為初始步 驟，尤為重要。目前關(guān)于葛仙米多糖的提取研究，主要 包括單因素、正交等，而尚未發(fā)現(xiàn)響應(yīng)面法提取葛仙 米中多糖的工藝研究。

葛仙米：湖南炎帝生物科技有限公司；葡萄糖醛 酸、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖：中國食品 藥品檢定研究院。 三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）、1-苯基-3-甲 基-5-吡唑啉酮 （3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5- one，PMP）、95 %乙醇（分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有 限公司。 水浴鍋（HWS24）：上海一恒科學(xué)儀器有限公司； 離心機(jī)（ST16R）：賽默飛世爾科技公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （RE-2000B）：上海亞榮生化儀器廠；高效液相色譜儀 （Uitimate 3000）：賽默飛世爾科技公司；電子天平（XSE 205DV）：梅特勒-托利多國際貿(mào)易有限公司；超聲儀 （HNS-SY-150）：北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司。

色譜柱：Welch Xtimate （4.6 mm×250 mm，5 μm）， 檢測波長：260 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL，流動相：以 0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖溶液（用 3 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 值至 6.7）為流動相 A，乙腈 為流動相 B，梯度洗脫，流動相梯度洗脫程序見表 1。

分別精密稱取甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄 糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及巖藻糖標(biāo) 準(zhǔn)品 100 mg 于 10 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻， 即得 9 種單糖的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。再配置成濃度分別為 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 的不同濃度梯度單糖混合標(biāo) 準(zhǔn)溶液。分別取 100 μL 的單糖標(biāo)準(zhǔn)液及不同濃度梯度 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，各加 200 μL、0.6 mol/L 的 NaOH 溶 液，置于 10 mL 的具塞試管中，漩渦混勻；再加 400 μL、 0.6 mol/L 的 PMP 甲醇溶液，漩渦混勻，充入 N2，在 70 ℃的烘箱中避光反應(yīng) 110 min，取出避光冷卻至室 溫，加 400 μL、0.3 mol/L 的 HCl 溶液中和，加水至 2 mL， 再加等體積的氯仿，漩渦混勻，靜置，棄去氯仿相，如此 萃取 3 次。將水相用 0.45 μm 微孔膜過濾后供高效液 相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC） 分析。

最終，通過回歸模型分析，以多糖水解后單糖總量得 率為評價(jià)指標(biāo)，葛仙米多糖適宜的提取工藝參數(shù)為浸 提時間 110 min、浸提溫度 97 ℃、料液比 1 ∶ 230（g/mL）； 在此條件下，得到單糖總量得率為 29.14 %，實(shí)際值與 理論值基本相符，說明模型對葛仙米多糖提取工藝條 件參數(shù)優(yōu)化可靠可行，具有一定的實(shí)用價(jià)值。



 

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