植物精油是從植物花、葉、莖、根、果實等部位中提取 的一類具有較強揮發(fā)性的植物次生代謝產(chǎn)物，其成分一 般由小分子、萜烯類、醇類、醛酮類等物質(zhì)組成，作用機理 復雜，較難使病原菌產(chǎn)生抗性，在農(nóng)林生物防治等領(lǐng)域具 有較好的應(yīng)用前景。植物精油來源于天然，具有對人體相對安全、與環(huán)境友好、生物活性多樣等特點，因此，從 天然植物中尋找廣譜、高效、低毒的殺菌劑，已成為科研 人員及農(nóng)藥使用人員的共同目標。

供試材料：油樟鮮葉于2018年10 月中旬采集于江西吉安。供試菌種：尖孢鐮刀菌（Fusari? um oxysporum），由鄭州精思威化工有限公司提供。供試 試劑：吐溫-80、丙酮、PBS緩沖液、無水硫酸鈉、ATP酶試 劑盒等均為分析純。培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 （PDA培養(yǎng)基）等。

ShimadzuGCMS-QP2020氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司生產(chǎn)；全自動高壓滅菌，上海 博迅實業(yè)有限公司生產(chǎn)；H-1650高速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司生產(chǎn)；DHP-9052電熱恒溫培養(yǎng)箱， 上海一恒科學儀器有限公司生產(chǎn)；SW-CJ-2F超凈工作 臺，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)等。

采用水蒸氣蒸餾法提 取油樟鮮葉精油，收集一定量的葉精油，并用無水硫酸鈉 干燥后置于分餾瓶中，再經(jīng)減壓分餾（-0.073MP），收集3 種不同溫度的餾分，分別為：60℃以下的餾分，標為A1號 精油；60～100℃的餾分，標為A2號精油；100～150℃的餾 分，標為A3號精油。

（1）色譜條件： Rxi-5Sil MS（30m×0.25mm×0.25μm）石英毛細管柱，載氣 為高純度氦氣（99.999%），流速為1.0mL/min，氣化室溫度 為220℃，柱起始溫度50℃（保持2min），以8℃/min的速率 程序升溫到160℃，以8℃/min升溫至250℃（保持15min）至 完成分析；分流比為20∶1，進樣量為0.5μL。

（2）質(zhì)譜條件： 離子源為EI，電子能量為70eV，離子源溫度為220.0℃，進 樣口溫度250℃掃描范圍m/z60～350。

分別取油樟葉精油 的3種餾分（A1、A2和A2）50μL、100μL、150μL、200μL與 25mL PDA混合倒平板，制得油樟葉精油的3個餾分濃度 為2μL/mL、4μL/mL、6μL/mL、8μL/mL的PDA培養(yǎng)基，并以 純PDA倒平板作對照。分別將尖孢鐮刀菌菌絲塊接種到 培養(yǎng)皿中央，重復3次，25℃恒溫培養(yǎng)5d后觀察拍照，計算 抑菌率。其中，接種在對照平板上的尖孢鐮刀菌菌落平均直徑為Do，接種在含餾分平板上的尖孢鐮刀菌菌落平 均直徑為Dx，則抑菌率（%）=（Do－Dx）/Do×100 （1）

用生長速率測定法分別測定餾分A3及主要單體成分對尖孢鐮刀菌菌絲 生長的抑制作用。在無菌操作條件下，向每個培養(yǎng)皿中 倒入9mL的PDA培養(yǎng)基，再分別加入1mL精油餾分A3及其 主要單體成分，對照組加入1mL丙酮，輕輕搖勻，制成平 板，待冷卻凝固后，每個培養(yǎng)皿中接入一個生長一致的菌 餅（d=5.0mm）。重復3次，25～26℃培養(yǎng)7d后，再用十字交 叉法測量菌落生長直徑，計算菌絲生長抑制率。相關(guān)計 算公式如下：
菌絲生長抑制率（%）=（對照組菌絲生長直徑－處理組菌 絲生長直徑）（/ 對照組菌絲生長直徑－菌餅直徑）×100 （2）

前期已采用GCMS聯(lián)用儀技術(shù)對油樟葉精油的3個餾分（A1、A2和A3）進行 了測定，結(jié)果顯示，A1 餾分中主要化學成分（相對百分含 量>1%）有6種：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-雙環(huán)-2- 己烯、α-蒎稀、4（10）-側(cè)柏烯、β-蒎烯、β-月桂烯和1，8- 桉葉油素；A2餾分中主要化學成分（相對百分含量>1%） 有8種：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-雙環(huán)-2-己烯、 α-蒎稀、4（10）-側(cè)柏烯、β-蒎烯、β-月桂烯、（+）-4-蒈烯、 γ-萜品烯和1，8-桉葉油素；A3餾分中主要化學成分（相對 百分含量>1%）有13種：α-蒎稀、4（10）-側(cè)柏烯、β-蒎烯、 β-月桂烯、（+）-4-蒈烯、D-檸檬烯、γ-萜品烯、石竹烯、大 根香葉烯B、1，8-桉葉油素、松油烯-4-醇和α-松油醇。3 個餾分中含量較高的均是1，8-桉葉油素，其次是4（10）- 側(cè)柏烯和α-蒎稀。油樟葉精油 各餾分（A1、A2和A3）對尖孢鐮刀菌均具有一定的抑制效 果，并分別隨著各餾分濃度的增加，抑制效果更加明顯。 當濃度為8μL/mL時，對尖孢鐮刀菌的抑制效果均最為明 顯，抑菌率分別達到79.09%、85.51%和89.81%（表1），油樟 葉精油餾分A3抑菌率分別為餾分A1和餾分A2的1.14和 1.05倍。其中餾分A3對 尖孢鐮刀菌的作用更強一些。在濃度相同的情況下 （150mg/L），油樟葉精油餾分A3、1，8-桉葉油素及α-松油 醇對尖孢鐮刀菌的抑制作用從大到小依次為餾分A3＞α松油醇＞1，8-桉葉油素；而隨著餾分A3、α-松油醇及1，8- 桉葉油素濃度的增加，抑制作用均增大。；隨后由于餾分A3 及其主要單體成分分別抑制了尖孢鐮刀菌的生長繁殖，同 時破壞尖孢鐮刀菌的菌體細胞膜，使分子質(zhì)量較大的還原 糖得以通過細胞膜滲出等因素，導致還原性糖含量上升。

油樟葉精油3個餾分中主要含有醇類化合物和烴類 化合物，這些化合物被廣泛應(yīng)用于香精香料、制藥及食品 工業(yè)等領(lǐng)域。如1，8-桉葉油素是世界10大精油品種之 一，具有抗菌 、殺蟲 、疏風解熱、祛濕解毒等作用， 同時也對多種藥物具有良好的透皮滲透作用 。α-松油 醇可用于香精的配制以及醫(yī)藥、農(nóng)藥、塑料、肥皂等工業(yè) 中，是玻璃器皿上色彩的優(yōu)良溶劑 。α-蒎稀是合成樟 腦、松油醇、香料、樹脂等化工產(chǎn)品的重要原料之一，具有 較好的抗腫瘤、抗真菌、抗過敏及改善潰瘍等生物活性及 獨特的反應(yīng)多樣性 。此外，油樟葉精油餾分中還含有一 些化學成分，其功效目前尚未明確，有待于進一步研究。 從天然植物精油中分離純化抑菌活性物質(zhì)，并將其 直接運用到防治，得到一種既有效控制農(nóng)作物病原真菌 病害又不至于對環(huán)境及其它生物造成傷害的藥劑，這不 僅能拓寬豐富的植物精油資源的用途，又能開創(chuàng)農(nóng)作物 病害生物防治的新途徑 。油樟屬于樟科樟屬植物，富 含有精油。本試驗對油樟葉精油餾分A3及其主要單體成 分進行抑菌研究，結(jié)果顯示，餾分A3及主要單體成分均具 有一定的抑菌活性，又以餾分A3效果最好，可能是由于餾 分A3多種抑菌成分協(xié)同抗菌作用的結(jié)果，因此，可作為一 種有待開發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進行研究。



 

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