板藍(lán)根為十字花科(Cruciferae)菘藍(lán)屬 Isatis L. 植物菘藍(lán) Isatis indigotica Fort. 的干燥根,主產(chǎn)于 長江以北的華北黃河流域,全國各地均有栽培,是 我國傳統(tǒng)中藥,應(yīng)用歷史悠久。其味苦,性寒, 具有清熱解毒、涼血利咽,臨床上多用于治療流行性感冒、流行性腮腺炎、流行性乙型肝炎、單皰病 毒性角膜炎、咽炎、扁平疣、紅眼病、淚囊炎、水 痘、麻疹等。
Bruker Avance 600 或 Bruker Avance 400 核磁共 振儀(德國 Bruker 公司);BT 125D 型電子分析天 平(德國賽多利斯有限公司);RE-2000E 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 器(上海東璽制冷儀器設(shè)備有限公司);SHB-IIIS 循環(huán)水式多用真空泵;精密鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);BSZ-100 自動部份收集器(上 海滬西分析儀器廠有限公司);1260 Infinity II 半制 備液相、1260 Infinity 分析液相(美國安捷倫科技有 限公司);CAPCELL PAK 半制備色譜柱(250 mm× 10 mm,5 μm),資生堂(中國)投資有限公司;ZF-2C 型暗箱式自動紫外分析儀(上海安亭電子儀器廠); 硅膠 G(青島海浪硅膠干燥劑廠,100~200、200~ 300 目);二氯甲烷、甲醇、乙醇、石油醚、醋酸乙 酯(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);乙腈(阿 達(dá)瑪斯試劑有限公司,HPLC 純);葡聚糖凝膠 LH-20 (美國 GE 公司);反相 ODS C18柱填料(日本島津公 司);純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。 板藍(lán)根藥材于 2017 年 7 月采自黑龍江省大慶 市,經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)王瑞教授鑒定為十字花科菘 藍(lán)屬植物菘藍(lán) Isatis indigotica Fort. 的干燥根,標(biāo)本(20170716SL)保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教 研室。
干燥的板藍(lán)根藥材 45 kg,經(jīng) 80%乙醇加熱回 流提取 3 次,減壓回收乙醇,分別用石油醚、二氯 甲烷、正丁醇萃取,得到石油醚部位 20 g、二氯甲 烷部位 170、正丁醇部位 800 g。二氯甲烷部位(170 g)經(jīng)硅膠柱色譜,二氯甲烷-甲醇(100∶0→100∶ 20)系統(tǒng)洗脫,合并相同流分,得到 11 個組分(F1~ F11),F(xiàn)9(6 g)經(jīng) ODS C18 柱色譜,乙腈-水(10%、 30%、50%、70%)洗脫得到 4 個組分 F9-1~F9-4, F9-2(0.2 g)經(jīng)半制備 HPLC(乙腈-水 22∶78)洗 脫得到化合物 1(3.9 mg,tR=24.4 min)和 6(5.8 mg, tR=17.2 min);F10(4 g)經(jīng) ODS C18 柱色譜,乙 腈-水(10%、20%、40%、60%)洗脫得到 4 個組 分 F10-1~F10-4,F(xiàn)10-1(0.3 g)經(jīng)半制備 HPLC(乙 腈-水 16∶84)洗脫得到化合物 8(19.7 mg,tR=21.3 min)和 10(6.6 mg,tR=22.5 min);F10-2(0.2 g) 經(jīng)半制備 HPLC(乙腈-水 21∶79)洗脫得到化合物 7(15.0 mg,tR=16.2 min)和 9(4.6 mg,tR=17.6min);F10-3(0.4 g)經(jīng)半制備 HPLC(乙腈-水 30∶ 70)洗脫得到化合物 11(9.4 mg,tR=19.0 min)和 12(7.8 mg,tR=16.3 min);F11(9 g)經(jīng)葡聚糖凝 膠柱色譜(甲醇-水 1∶1 洗脫),合并相同流分得到 8 個組分(F11-1~F11-8),F(xiàn)11-2(0.1 g)經(jīng)半制備 HPLC(乙腈-水 7∶93)洗脫得到化合物 4(4.1 mg, tR=13.2 min)和 5(8.6 mg,tR=16.3 min);F11-4 (0.5 g)經(jīng)半制備 HPLC(乙腈-水 5∶95)洗脫得到 化合物 2(107 mg,tR=6.4 min)和 3(87 mg,tR= 5.5 min)。
化合物 1(2 mg)經(jīng) 2 mol/L 鹽酸(5 mL)80 ℃ 水解 5 h,冷卻后水解液用醋酸乙酯萃取 2 次,每次 10 mL,水相經(jīng) ODS C18柱色譜,5%乙腈-水等度洗脫,得到單一組分,經(jīng)薄層色譜(TLC)檢測(正 丁醇-醋酸乙酯-水 4∶1∶5),與標(biāo)準(zhǔn)糖對照檢出葡 萄糖(Rf 值 0.37)。測定旋光數(shù)據(jù)([α] 20 D +33.1°), 確定其為右旋糖,所以葡萄糖的構(gòu)型鑒定為 D 型。
化合物 1:紅色粉末,易溶于甲醇,[α] 20 D −10.6° (c 0.14, 甲醇)。 KBr max IR ν (cm−1 ): 3 420, 2 939, 1 724, 1 598, 1 514, 1 261, 1 139, 1 071, 1 025, 813。高分辨 質(zhì)譜給出準(zhǔn)分子離子峰 m/z 437.133 5 [M-H]- ,計 算值 437.134 9,確定其分子式為 C23H22N2O7。 1 H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) 譜圖(表 1)中,給 出 2 組鄰二取代苯氫信號 7.81 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-4′), 7.04 (1H, dd, J = 7.6, 7.8 Hz, H-5′), 7.25 (1H, dd, J = 7.8, 8.0 Hz, H-6′), 7.53 (1H, d, J = 8.0 Hz,H-7′) 和 7.60 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-4″), 6.90 (1H, dd, J = 7.5, 7.5 Hz, H-5″), 7.53 (1H, dd, J = 7.5, 8.0 Hz, H-6″), 7.00 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-7″),2 組-NH 信號 11.14 (1H, brs, NH-1′) 和9.93 (1H, brs, NH-1″) 以及 1 組葡萄糖端基氫信號 4.84 (1H, d, J = 7.5 Hz, Glc-H-1)。
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