翅莢決明(Cassia alata Linn.)是豆科決明屬多年生直立灌木,原產(chǎn)于熱帶美洲,今在我國(guó)云南、廣西、臺(tái) 灣等南部地區(qū)已有大面積栽培 。翅莢決明是一種具有 觀賞性和較高藥用價(jià)值(如抗菌、抗炎、緩瀉、 驅(qū)蟲(chóng)、抗氧化等藥理活性)的植物。翅莢決明生長(zhǎng) 速度迅速、分枝力強(qiáng)、生物產(chǎn)量高、葉量豐富、草質(zhì)柔 軟,是南方人工草地建植、石漠化地區(qū)生態(tài)修復(fù)的優(yōu)勢(shì) 豆科牧草品種之一 。目前,尚未見(jiàn)有翅莢決明飼喂動(dòng) 物食用安全性試驗(yàn)的相關(guān)研究報(bào)道。為考察翅莢決明飼 用對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的影響,開(kāi)展了翅莢決明飼喂昆明小 鼠的安全性試驗(yàn),以期為翅莢決明植物資源作為動(dòng)物食 用性的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。
健康清潔級(jí)昆明種小白鼠,雌、雄各半,7~8 周齡, 體重 16~20 g,購(gòu)于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物合 格證號(hào) :XCXK 桂 2009-2002。清潔級(jí)環(huán)境飼養(yǎng),在人 工照明 12 h、室溫 16~24 ℃、相對(duì)濕度 57%~62%、通風(fēng) 良好情況下飼養(yǎng),觀察 7 d 后進(jìn)行試驗(yàn)。
翅莢決明嫩枝葉采摘于廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所 牧草綜合試驗(yàn)基地。將翅莢決明葉洗凈,烘干至恒重, 通過(guò)粉碎機(jī)粉碎后過(guò) 80 目篩,陰暗干燥處保存。精密稱 取翅莢決明葉粉末,使用 0.3% 羧甲基纖維素鈉溶液為溶 劑制備翅莢決明懸浮液,翅莢決明懸浮液依靠實(shí)際需要 的濃度配置,現(xiàn)配現(xiàn)用。
希森美康全自動(dòng)血球分析儀(日本希森美康株式會(huì) 社),全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司),電子分析天 平(梅特勒托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司),恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技儀器有限公司),臺(tái)式高容量離心機(jī)(德國(guó) Eppendor 公司),尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總蛋白 (TP)和總膽固醇(CHO)等血液生化指標(biāo)試劑盒(南 京建成生物工程公司產(chǎn)品)。
將昆明小鼠 50 只(雌、雄各半),隨機(jī)分為 4 個(gè) 劑量組和 1 個(gè)空白組,每組 20 只,4 個(gè)劑量組分別以 6 000、3 000、1 500 mg/kg·BW 和 750 mg/kg·BW 的 劑量在 24 h 內(nèi)灌胃 1 次翅莢決明懸浮液,空白組小鼠灌 胃等體積的溶劑(0.3% 羧甲基纖維素鈉溶液)。所有小 鼠灌胃前后 6 h 禁食不禁水,并在灌胃后每天記錄小鼠 的飲食、飲水量變化、中毒時(shí)間、癥狀及死亡數(shù)量,計(jì) 算半數(shù)致死量(LD50)。預(yù)試驗(yàn)第8 d,將所有小鼠斷頸 處死,剖檢并觀察心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸 腺、胃﹑腸道等臟器的病變情況。若未能測(cè)出半數(shù)致死 量(LD50),則進(jìn)行最大耐受試驗(yàn)。
因急性毒性預(yù)試驗(yàn)中小鼠在灌胃的最大給藥體積 6 000 mg/kg·BW 條件下未測(cè)出 LD50,故采用 24 h 內(nèi)單 次給藥的方法測(cè)定藥物的最大給藥量,以評(píng)價(jià)翅莢決明 的亞慢性毒性。具體方法如下 :將 40 只禁食 12 h 的小 鼠(雌、雄各半)均分為 2 組,分別為藥物組和空白組, 藥物組劑量為 6 000 mg/kg·BW 翅莢決明懸浮液,空白 組小鼠灌胃等體積 0.3% 羧甲基纖維素鈉溶液。灌胃藥 物后持續(xù)觀察 30 min,并在給藥結(jié)束后 2 h 再觀察 1 次, 之后每天觀察 1 次,仔細(xì)記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和特點(diǎn), 毒性反應(yīng)出現(xiàn)和消失的時(shí)間、死亡時(shí)間。連續(xù)觀察 7 d, 記錄觀察期內(nèi)小鼠自由采食和飲水的情況。觀察期結(jié)束后將所有存活小鼠處死,進(jìn)行眼觀病理學(xué)檢查。
在觀察灌胃后至第 7 d 的試驗(yàn)過(guò)程中,小鼠外觀靈 活自如,精神狀態(tài)良好,食欲逐步增加,排泄物無(wú)異味 異樣,呼吸平穩(wěn),無(wú)不良反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。因未能測(cè)出LD50,故進(jìn)行最大耐受試驗(yàn)。小 鼠 在 單 日 給 藥 量 為 6 000 mg/kg·BW 時(shí), 無(wú) 任 何毒性反應(yīng),觀察期結(jié)束后處死所有小鼠,通過(guò)解剖 未發(fā)現(xiàn)明顯可見(jiàn)的病理變化。結(jié)果表明,最大給藥量為 6 000 mg/kg·BW 時(shí),翅莢決明實(shí)際無(wú)毒。試驗(yàn)結(jié)果表明,各組小鼠試驗(yàn)期間各組均無(wú)死亡,臨床表現(xiàn)正常 ;各試驗(yàn)組體重與空白組比較 :高劑量組 給藥后 10 d 至試驗(yàn)結(jié)束對(duì)雄性和雌性小鼠體重增長(zhǎng)均有 顯著作用(P<0.05 或 P<0.01),中劑量和低劑量組給藥 后 30 d 至試驗(yàn)結(jié)束對(duì)雄性小鼠體重增長(zhǎng)均有顯著作用 (P<0.05 或 P<0.01),中劑量組給藥后 10 d 至試驗(yàn)結(jié)束 對(duì)雌性小鼠體重增長(zhǎng)均有顯著作用(P<0.05 或 P<0.01), 低劑量組給藥后 40 d 至試驗(yàn)結(jié)束對(duì)雌性小鼠體重增長(zhǎng)均 有顯著作用(P<0.05 或 P<0.01)。
因本次研究使用的試驗(yàn)材料是翅莢決明的葉子粉 末,不溶于水,故使用羧甲基纖維素鈉為溶液為溶劑, 制備翅莢決明懸浮液進(jìn)行試驗(yàn)考察。在急性毒性試驗(yàn) 中,小鼠未出現(xiàn)死亡及毒性反應(yīng),故未能測(cè)出半數(shù)致死 量(LD50)。在最大耐受試驗(yàn)中,對(duì)小鼠 24 h 內(nèi)單次灌胃 最大給藥量 6 000 mg/kg·BW 時(shí)仍未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng), 7 d 觀察期結(jié)束后處死存活小鼠,通過(guò)解剖未發(fā)現(xiàn)明顯可 見(jiàn)的病理變化,結(jié)果表明翅莢決明無(wú)急性毒性作用。
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