青刺果 Prinsepia utilis Royle 又名青那果,含油 量高,是一種主要分布于中國云南麗江地區(qū)的薔薇 科扁核木屬植物,生于海拔 1 800 ~ 3 200 m 的 山坡、山谷或路旁等處。目前青刺果黃酮提取物 在藥理方面有相關(guān)報(bào)道,主要集中在青刺果總黃酮 提取物的降血糖、降血脂的作用,對(duì)動(dòng)物內(nèi)臟的 保護(hù)作用以及免疫調(diào)節(jié)作用等。
1 儀器與試藥
1. 1 儀器
FA2004 電子天平( 上海??惦娮觾x器廠) ; KQ5200DB超聲波清洗機(jī) ( 昆山市超聲儀器有限公司) ; RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀器廠) ; HWS24 電熱恒溫水浴鍋( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; Cary 60 UV-vis 紫外可見分光光度計(jì)( 美國安捷倫科技有限公司) ; QE-200 萬能粉碎機(jī)( 浙江屹立 工貿(mào)有限公司) ; TC-15 套式恒溫箱( 海寧市新華醫(yī) 療器械廠) ; 84-1A 磁力攪拌器( 上海司樂儀器有限 公司) 。
1. 2 試藥
青刺果仁( 購于云南麗江,經(jīng)昆明植物研究所 劉海洋研究員鑒定為青刺果 Prinsepia utilis Royle 的 果仁) ; 蘆丁對(duì)照品( 上海源葉生物科技有限公司, 批號(hào): Y01D8S49613,含量≥98% ) ; DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl,上海阿拉丁生化科技股份有 限公司批號(hào): E1702052,含量≥97% ) ; ABTS 試劑盒 ( 南京建成生物工程研究所,批號(hào): A015-2) ; 維生素 C 原料藥( 武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司,規(guī)格: 25 kg /桶,批號(hào): 200-066-2) ; Trolox 制劑( 水溶性維生素 E 溶液,規(guī)格: 10mmol·L - 1 ,南京建成生物工程研究 所,批號(hào): A015-2-1) ; D101 大孔樹脂( 滄州寶恩吸附 材料公司,批號(hào): 20170323) ; 乙醇( 江蘇強(qiáng)盛功能化 學(xué)股份有限公司,批號(hào): 20170602) ; 正己烷( 上海阿 拉丁生化科技股份有限公司,批號(hào): K1728091) 。
2 方法與結(jié)果
2. 1 青刺果仁的脫脂
取干燥青刺果仁少許經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后,稱取適 量,按一定比例與正己烷在三角瓶中混勻,加入磁 子,封口,將三角瓶放于磁力攪拌器上攪拌一定時(shí) 間,隨后用一次性滴管吸出三角瓶中的正己烷油脂 混合物; 用上述方法攪拌數(shù)次,合并所得正己烷油脂 混合物,經(jīng)減壓濃縮去除正己烷,干燥后即得青刺果 仁油脂。按下式計(jì)算得油率。 得油率( % ) = 青刺果仁中油脂質(zhì)量/青刺果 仁的質(zhì)量 × 100 % 。 采用 Orthogonality Experiment Assistant 2. 3 軟件 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。
2. 2 青刺果仁總黃酮的提取
將脫脂后的青刺果仁粉末,準(zhǔn)確稱量 200 g,以 料液比 1 ∶ 8 的比例將青刺果仁材料加入 70 % 的乙 醇水溶液,在 75℃ 條件下回流提取 2 次,合并兩次 的提取液并進(jìn)行過濾富集,經(jīng)減壓濃縮、水浴蒸干, 得總黃酮粗提物。
2. 3 脫脂單因素試驗(yàn)結(jié)果
2. 3. 1 料液比對(duì)青刺果仁脫脂效果的影響
在浸 出次數(shù)為 2 次,浸出時(shí)間為 60 min 時(shí),分別考察料 液比 1 ∶ 2、1 ∶ 3、1 ∶ 5、1 ∶ 8、1 ∶ 12、1 ∶ 16 對(duì)青刺果仁 脫脂效果的影響。在料液比不斷加大 的情況下,得油率隨即上升,在 1 ∶ 5 后開始有所下 降,可能是由于料液比過大后,易導(dǎo)致?lián)]發(fā)性油脂揮 發(fā)所致?;诖?,選取料液比為 1 ∶ 5。
3 討論
該試驗(yàn)先采取了乙醇直接提取的方式對(duì)青刺 果仁進(jìn)行提取分離,結(jié)果發(fā)現(xiàn)油狀極為明顯,雖然在 此條件下總黃酮含量為 40% ,但是過柱分離時(shí)間超 過 36 h,極大的影響分離純化效率,因此脫脂是非常 有必要的。通過脫脂單因素考察,建立 3 因素 3 水平的正 交試驗(yàn)方案,優(yōu)選得到最佳脫脂工藝為浸出次數(shù) 5 次,料液比 1 ∶ 2,浸出時(shí)間 100 min,在此工藝條件下 測(cè)得,青刺果仁總黃酮含量超 50% ,過柱分離效率 也大有提升。其次,青刺果仁總黃酮表現(xiàn)出很強(qiáng)的 DPPH·、ABTS + · 清 除 能 力,其 IC50 值 分 別 為 0. 014 0,0. 163 0 mg·ml - 1 ,未來在抗氧化藥物、化 妝品等領(lǐng)域內(nèi)具有一定的開發(fā)和研究?jī)r(jià)值。
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