藍(lán)莓（Vaccnium sp.）為杜鵑花科（Ericaceae） 越桔屬（Vaccinium）多年生常綠或落葉灌木，具 有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由麗赤殼屬（Calonectria）、 鐮孢屬（Fusarium）真菌引起的藍(lán)莓根腐病是藍(lán) 莓主產(chǎn)區(qū)的重要病害。病原菌通過(guò)土壤進(jìn)行傳 播，侵染藍(lán)莓后可導(dǎo)致全株死亡。貴州省藍(lán)莓 根腐病由尖鐮孢菌（F. oxysporum），主要 依靠傳統(tǒng)的化學(xué)防治，對(duì)藍(lán)莓果實(shí)品質(zhì)會(huì)造成一 定影響。因此，尋找環(huán)境中有益微生物是目前防 治藍(lán)莓根腐病的發(fā)展方向。

1 材料與方法

1.1 土壤樣品采集

于 2017 年 4—7 月，選擇貴陽(yáng)麻江縣藍(lán)莓種 植基地（東經(jīng) 107°43′07″、北緯 26°25′49″）藍(lán)莓 發(fā)病區(qū)附近健康藍(lán)莓植株，利用抖根法獲得根際 土壤樣品，該基地藍(lán)莓根腐病發(fā)生率為 18.5% 左 右。根際土壤樣品沿等高線分別設(shè)置 5 個(gè)樣地 （5 m×5 m），在各樣方隨機(jī)選擇 8 株土壤樣品采 集。土壤樣品裝入無(wú)菌袋，便攜式低溫保溫箱中帶回實(shí)驗(yàn)室，冰箱低溫保存（4 ℃）。

1.2 根際土壤真菌的分離培養(yǎng)

1.2.1    供試培養(yǎng)基

藍(lán)莓根際土壤真菌的分離和純化采用馬鈴薯 葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）、察氏培養(yǎng)基（Czapek）、 馬 丁 氏 培 養(yǎng) 基 （ Martin） 和 孟 加 拉 紅 培 養(yǎng) 基 （PDAm）。

1.2.2    土壤真菌的分離培養(yǎng)

5 個(gè)樣地采集到的根際土壤等量混合作為 供試土壤。采用平板稀釋法，將土壤樣品稀釋至10−2 倍，靜置 5 min 后選取 200 μL 上清液在 PDA、 Czapek、Martin 和 PDAm 中進(jìn)行涂布，每種培 養(yǎng)基設(shè)置 10 個(gè)重復(fù)。利用菌絲末端挑取法，分 別挑取 4 種不同平板培養(yǎng)基中生長(zhǎng)形態(tài)差異典 型的真菌菌株轉(zhuǎn)接至 PDA，28 ℃ 恒溫培養(yǎng) 箱（黑龍江東拓儀器有限公司，中國(guó)）培養(yǎng)，純化 3～5 次。

2 結(jié)果與分析

由表 1 可知，利用平板稀釋法共分離獲得的 菌落形態(tài)具有明顯差異的真菌 80 株。通過(guò) rDNAITS 序列進(jìn)行比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，80 株真菌分別隸 屬 6 個(gè)綱 6 個(gè)目 11 屬 51 種，這些菌株與 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中的已知真菌 rDNA-ITS 序列相似性都達(dá) 到了 99% 和 100%，同源性非常高。在分離得到 的 80 株真菌中，青霉屬（Penicillium）14 種、木 霉屬（Trichoderma）13 種、鐮孢屬（Fusarium）7 種、孢球托霉屬（Gongronella）5 種，籃狀菌屬 （Talaromyces）3 種、擬青霉屬（Purpureocillium）3 種、毛殼屬（Chaetomium）2 種，毛霉屬 （Mucor）2 種、曲霉屬（Aspergillus）、粘帚霉 屬 （ Gliocladium）、 擬 小 球 殼 孢 屬 （ Microsphaeropsis）各 1 種。其中，青霉屬分離得到的菌 株數(shù)量最多，為藍(lán)莓根際土壤真菌群落的優(yōu)勢(shì) 屬，占菌株總數(shù)的 27.50%。子囊菌門中，木霉屬 和鐮孢屬次之，均占菌株總數(shù)的 16.25%?；@狀菌 屬、毛殼屬均占菌株總數(shù)的 5.00%。粘帚霉屬、 擬青霉屬和曲霉屬分離得到菌株數(shù)相同，各占總 菌株數(shù)的 3.75%。小球殼孢屬只分離得到 1 株， 占總菌株數(shù)的 1.25%。接合菌門的孢球托霉屬分 離得到 13 株，同樣為優(yōu)勢(shì)屬，分離頻率為 16.25%。 毛霉屬真菌分離得到 2 株，分離頻率為 2.50%。

3 結(jié)論與討論

上海一恒對(duì)有關(guān)藍(lán)莓根際土壤真菌研究的較少。雖然藍(lán) 莓為栽培種植，但了解藍(lán)莓根際土壤真菌多樣性 對(duì)其土壤真菌種群特性研究具有重要意義。本研 究從藍(lán)莓根腐病發(fā)生區(qū)附近健康藍(lán)莓根際土壤中 分離得到的真菌，主要屬于青霉屬（27.50%）、 木霉屬（16.75%）、鐮孢屬（16.75%）、孢球托 霉 屬 （ 16.75%）， 籃 狀 菌 屬 （ 5%）、 曲 霉 屬 （3.25%）和小球殼孢屬（1.25%）等，與研究的 其他物種根際土壤真菌相近。藍(lán)莓根際土壤 真菌的優(yōu)勢(shì)屬與其他物種根際土壤的優(yōu)勢(shì)種群相 似，但在種群組成上存在一定差異，可能是由于 藍(lán)莓菌根菌的存在所致。