不同培養(yǎng)箱對大腸埃希菌生長的影響

來源：未知發(fā)布日期：2019-04-15 12:02【大中小】

大腸埃希菌（革蘭氏陰性短桿菌），俗名大腸桿菌，周身鞭毛，能運動，無芽孢，是人和動物腸道中的正常棲居菌。大腸埃希菌的致病物質(zhì)之一是血漿凝固酶。根據(jù)致病性的不同，致瀉性大腸埃希菌被分為產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌、腸道侵襲性大腸埃希菌、腸道致病性大腸埃希菌、腸集聚性黏附性大腸埃希

菌和腸出血性大腸埃希菌 5 種。部分埃希菌菌株與嬰兒腹瀉有關(guān)，并可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發(fā)。在實際工作中，常用到培養(yǎng)箱對各種樣品進行培養(yǎng)分離，而不同原理的培養(yǎng)箱對大腸埃希菌的生長有不同的影響。其中，常用的培養(yǎng)箱有 3 類：隔水式培養(yǎng)箱、電熱式培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱。

隔水式培養(yǎng)箱:
是具有高精度的恒溫設(shè)備，其溫度波動范圍為±0.5℃，可用于植物組織發(fā)芽、育苗、微生物的培養(yǎng)、昆蟲和小動物的飼養(yǎng)、水質(zhì)檢測的生化需氧量（BOD）的測定及其他用途的恒溫試驗，是生物遺傳工程、醫(yī)藥、農(nóng)、林、環(huán)境科學、畜牧、水產(chǎn)等生產(chǎn)、科研、教育部門的理想設(shè)備。

電熱式培養(yǎng)箱:
的外殼通常用石棉板或鐵皮噴漆制成，電熱式培養(yǎng)箱的夾層用石棉或玻璃棉等絕熱材料制成，以增強保溫效果，培養(yǎng)箱頂部設(shè)有溫度計，用溫度控制器自動控制，使箱內(nèi)溫度恒定。直接電熱式培養(yǎng)箱采用的是用電熱絲直接加熱，利用空氣對流，使箱內(nèi)溫度均勻，其溫度波動范圍為±2℃。

生化培養(yǎng)箱:
具有制冷和加熱雙向調(diào)溫系統(tǒng)，溫度可控的功能，其溫度波動范圍為±2.5℃，是生物、遺傳工程、醫(yī)學、衛(wèi)生防疫、環(huán)境保護、農(nóng)林畜牧等行業(yè)的科研機構(gòu)、大專院校、生產(chǎn)單位或部門實驗室的重要試驗設(shè)備，廣泛應(yīng)用于低溫恒溫培養(yǎng)、培養(yǎng)試驗、環(huán)境試驗等試驗過程中。生化培養(yǎng)箱控制器電路由溫度傳感器、電壓比較器和控制執(zhí)行電路組成。雖然 3 種培養(yǎng)箱都可以培養(yǎng)大腸埃希菌，但是3 種培養(yǎng)箱的加熱方式不一樣，溫度波動范圍不同，對大腸埃希菌的生長有一定的影響。

材料與方法
1. 儀器
生物安全柜；電熱式培養(yǎng)箱（DH6000B，上海一恒科學儀器有限公司）；隔水式培養(yǎng)箱（HENGZi，上海一恒科學儀器有限公司）；生化培養(yǎng)箱（LRH-150F 智能型，上海一恒科學儀器有限公司）。試劑與材料大腸埃希菌標準菌株（ATCC25922）；營養(yǎng)瓊脂（170103）；乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（170517）；滅菌生理鹽水（201702140）。1 菌種的活化將凍藏的大腸埃希菌標準菌株磁珠用接種環(huán)取出，用接種環(huán)把大腸埃希菌標準菌株磁珠在營養(yǎng)瓊脂平板上分區(qū)劃線。把劃線的營養(yǎng)瓊脂平板放入（37±0.5）℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h。

2. 菌液的制備以及菌落的計數(shù)
挑取菌落到 1 mL 滅菌磷酸緩沖液中。從菌懸液中吸取 0.5~4.5 mL 滅菌生理鹽水中，制成 1∶10 的稀釋液，然后逐一 10 倍稀釋到 10-7 麥氏比濁度。取 10-7 麥氏比濁度的稀釋液采用多管發(fā)酵法完成實驗。取樣量分別為 1 mL、0.1 mL、0.01 mL。每次試驗做 3 份多管發(fā)酵法試驗，共做 7 次。每次試驗的 3 份多管發(fā)酵法試驗分別放入隔水式培養(yǎng)箱、電熱培養(yǎng) 箱、生化培養(yǎng) 箱中，44.5℃培養(yǎng) 24 h。同時吸取 10-7 麥氏比濁度的稀釋液 2 mL，分別于 2 個平皿各 1 mL，每個平皿傾注約15 mL 已融化并冷卻到約 45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使稀釋液與培養(yǎng)基充分混勻，待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于 44.5℃培養(yǎng)內(nèi)培養(yǎng) 48 h，進行菌落計數(shù)，共做 7 次。

3.溫度的記錄
從早上開始上班時記錄不同培養(yǎng)箱的的溫度，每隔 1 h 記錄一次。隔水式培養(yǎng)箱培養(yǎng)大腸埃希菌的 MPN 值與平皿菌落總數(shù)相比較，差異無統(tǒng)計學意義（t=1.807，P＞0.05）（t 為樣品平均數(shù)與總體平均數(shù)的離差統(tǒng)計量；P 為假設(shè)兩組比較無差異的概率）；電熱式培養(yǎng)箱和生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)大腸埃希菌的 MPN 值與平皿菌落總數(shù)相比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.700、5.004，P＜0.05）。由上述實驗結(jié)果可知，培養(yǎng)箱溫度的波動情況對大腸埃希菌在的生長有很大的影響。使用溫度波動范圍小的培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)時，用多管發(fā)酵法得到的大腸埃希菌的 MPN 值的 RSD 值相對較小，結(jié)果值相對穩(wěn)定；同時用多管發(fā)酵法得到的大腸埃希菌的 MPN 值與平皿得到的菌落數(shù)相比較，差異也無統(tǒng)計學意義。但是在溫度波動范圍大的時候，多管發(fā)酵法得到的大腸埃希菌的 MPN 值的 RSD 值相對較大，說明結(jié)果值不穩(wěn)定，可靠性不高；同時，在溫度波動范圍大的時候，用多管發(fā)酵法得到的大腸埃希菌的 MPN 值與平皿得到的菌落數(shù)相比較，差異有統(tǒng)計學意義，同樣也說明結(jié)果值不可靠。

綜上所述，培養(yǎng)箱是大腸埃希菌生長繁殖的良好場所，但是溫度波動大小對大腸埃希菌的生長有很大的影響，溫度波動太大時，得到的結(jié)果值的可靠性不高。因此，在對分離培養(yǎng)大腸埃希菌時，應(yīng)盡量選擇溫度波動范圍較小的培養(yǎng)箱。

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