嘔吐毒素是主要由鐮刀菌屬（Fusarium） 產(chǎn)生的 一種 B 型單端孢霉烯族真菌毒素， 廣泛存在于小 麥、 大麥和玉米等糧谷類食品中， 是主要真菌 性毒素污染物之一， 對人體的危害主要表現(xiàn)為惡 心、腹瀉、嘔吐等急性癥狀， 侵害機體免疫系統(tǒng)， 歐盟分類標準為三級致癌物。 當前， 全球有 30 余個國家針對食品或谷物中的嘔吐毒素制定了相關(guān) 限量標準， 我國 GB 2761－2017規(guī)定了谷物及谷 物制品中嘔吐毒素的限量標準為 1.0 mg/kg。 GB 5009.111－2016中規(guī)定了嘔吐毒素的檢測方法有 同位素稀釋液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法、 免疫親和層析 凈化高效液相色譜法、 薄層色譜測定法、 酶聯(lián)免疫 吸附篩查法。

一、 實驗部分 

（一） 材料、 試劑與儀器

 嘔吐毒素免疫親和 柱 （Romer Labs， MO， USA）； 脫氧雪腐鐮刀菌烯（嘔吐毒素） 標準品 （純度>99％， Pribolab Pte. Ltd.Singapore） ； 甲 醇 （ 色 譜 純 ， SCHARLAB S L）； 乙醇 （分析純， 西隴科學股份有限公司）； NY 針頭式過濾器（WondaDisc Ⅱ，SHIMADZU-GL）； 磷 酸緩沖液 （10 mM， pH 7.4， Sigma）。 本次評價實驗使用的嘔吐毒素快速檢測試紙 條 / 卡， 采取網(wǎng)上咨詢， 選擇 4 家知名度較高的公 司的快檢產(chǎn)品， 為避免評價結(jié)果對生產(chǎn)廠家造成影 響， 對快檢產(chǎn)品進行了編序， 分別為 A、 B、 C、 D 公司。 高效液相色譜儀 （Agilent Technologies）； C18 色譜柱 （Analytical 4.6×150mm 5-Micron， Agilent Technologies） ； Milli-Q 超 純 水 處 理 系 統(tǒng) （ 美 國 Millipore）； 電熱恒溫鼓風干燥箱 （一恒DHG-9420A， 上海一恒科學儀器有限公司）； 電子天平 （QUINTIX213-1CN， 賽多利斯科學儀器有限公司）； 組織 粉碎機 （JYL-C16V， 九陽股份有限公司）； 震蕩器 （MMV-1000W， 上海愛朗儀器有限公司）。 

（二） 嘔吐毒素添加回收實驗

 為確保儀器檢 驗盲樣均勻性實驗的準確度， 在盲樣制備實驗之前 先做嘔吐毒素添加回收實驗。 具體步驟為：（1） 選 取未檢出嘔吐毒素的大米， 經(jīng)組織粉碎機研磨后過 篩 （0.6 mm）， 收集大米粉；（2） 制備 9 個樣品， 平 均分成 3 組。 每組樣品中添加嘔吐毒素標準品， 終 濃度分別為 0.5、 0.8、 1.0 mg/kg；（3） 以國家標準 GB 5009.111－2016的第二法： 免疫親和層析凈 化高效液相色譜法對上述樣品進行檢測， 并計量樣 品的添加回收率。 （三） 盲樣制備 根據(jù) 《食品快速檢測方法評 價技術(shù)規(guī)范》的要求， 本次評價實驗所用盲樣選 擇大米粉作為基質(zhì)。 該規(guī)范同時對測試水平的設(shè)置 提出了要求， 測試水平一般應(yīng)包括食品基質(zhì)空白樣 品， 標準方法檢出水平 （或者標準限量值） 的 0.5、 1、 2 倍水平或者其他可檢測區(qū)分的水平 （不少于 3 個）， 或者方法標稱檢出限 0.5、 1、 2 倍水平或者 其他可檢測區(qū)分的水平 （不少于 3 個）。 根據(jù)膠體 金免疫層析法的特性， 本次評價實驗設(shè)置 4 個測試 水平， 分別為 0 mg/kg （空白樣品）、 0.5 mg/kg （陰 性樣品 1） 、 0.8 mg/kg （陰 性 樣 品 2） 、 1.0 mg/kg （陽性樣品 1）。

二、 結(jié)果與討論 

（一） 添加回收實驗結(jié)果 

為保證儀器分析方 法的科學性， 在開展評價實驗前， 先驗證嘔吐毒素 在大米粉基質(zhì)中的添加回收率， 結(jié)果見表 1。

（二） 均勻性檢驗結(jié)果 

按照 CNAS－GL003： 2018 對樣品的均勻性和穩(wěn)定性進行驗證。 首先對 各濃度水平的盲樣進行檢測， 3 個濃度水平的回收 率分別為 91.2％、 104.5％、 102％ 。 然 后， 采用單因素方差分析法 （F －檢驗） 對數(shù)據(jù)進 行統(tǒng)計分析， 組間自由度為 5， 組內(nèi)自由度為 12， 查看 GB/T 15000.5－1994的附錄 B “F 檢驗法臨 界值表”， F0.05（5，12）＝3.11， SPSS 軟件分析實驗結(jié) 果的 F 值分別為 2.68、 2.95、 0.76， 對應(yīng)的 P 值分 別為 0.075、 0.058、 0.597 。 3 組濃度水平 的 F 值均0.05， 結(jié)果表明， 在 顯著水平 α＝0.05 時， 同一濃度水平的所有樣品間 無顯著性差異， 即制備的樣品是均勻的。 

（三） 樣品的穩(wěn)定性檢驗 

將不同儲存時間樣 品的檢測平均值與初始檢測平均值進行一致性比 較， 按照 CNAS－GL003： 2018中穩(wěn)定性檢驗的 要求， 采用 t 檢驗法 “二個平均值之間的一致性” 公式計 算 t 值 。 查 GB/T 15000.5－ 1994 的附錄 F “T 檢驗法分位數(shù)表”，t 0.05 （22）＝ 2.07， 計算的 t 值分別是 4.03、 4.71、 6.61， 所有 t 值均> t0.05 （22） ＝2.07， 表明各儲存時間的檢測結(jié) 果與初始檢測結(jié)果之間存在顯著性差異。 隨著儲存 時間的延長， t 值逐漸增大， 表明儲存時間越長， 嘔吐毒素的檢測值變化越大， 在 1 周時間內(nèi)， 檢測值僅相差 0.075。 本研究制備的樣品， 在 1 周時間 內(nèi)完成對嘔吐毒素快檢產(chǎn)品的評價， 對評價結(jié)果不 會造成顯著影響。

三、 結(jié)論 

采用空白大米粉基質(zhì)加標的方法制備 4 種不同濃度水平的嘔吐毒素樣品， 對 4 個不同廠家 的膠體金免疫層析試紙條 / 卡進行評價測試。 根據(jù) 評價結(jié)果可知， 樣品的添加回收率較高， 制備的盲 樣均勻性良好， 快檢產(chǎn)品的包裝、 說明書、 試劑和 配備器具等完好， 產(chǎn)品的檢測限符合標準要求， 現(xiàn) 場使用的適用性良好。 產(chǎn)品的假陰性率均為 0％， 假陽性率≥33％， 不符合快檢方法指標的要求， 此 結(jié)果與膠體金免疫層析法的固有特點有關(guān)。 另外， 本研究發(fā)現(xiàn)樣品濃度水平設(shè)置是決定評價結(jié)果的關(guān) 鍵因素， 快檢行業(yè)亟需制定一套公認的、 科學合理 的評價方法。

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