引 言 　　

短瓣金蓮花（ＴｒｏｌｌｉｕｓｌｅｄｅｂｏｕｒｉＲｅｉｃｈｂ）系毛茛科金蓮花 屬植物，主要分布于我國黑龍江及內(nèi)蒙古東北部地區(qū)，以 花 入藥，具 有 清 熱 解 毒、消 腫、明 目 的 功 效，主 要 用 于 治 療 急 慢性扁桃體炎、急性中耳炎、急性淋巴管炎等癥?，F(xiàn)代藥 理研究表明，短瓣金蓮 花 具 有 抗 菌、抗 炎 鎮(zhèn) 痛、抗 氧 化 等 活 性。文獻報道短瓣金蓮花含有黃酮（苷）類、酚酸類、香豆 素類、苯乙素類、揮發(fā)油等多種化學成分。目前對該藥材 質(zhì)量標準的研究多是以高效液相色譜法 （ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）測定其 指 標 成 分，如 葒 草 苷、 牡荊苷等。高效液相色譜法是目前廣泛使用的高效分離分 析技術(shù)，然而該法費用較高，分離方法的建立及測試往往費時繁瑣，所需大量流 動 相（甲 醇、乙 腈 等）具 有 毒 性，而 且 利 用該法定性分析時通常需要借助于標準物質(zhì)才能完成。因 此，需要一種快速、有效、可行的方法對中藥提取物進行整 體系統(tǒng)的分析及逐一鑒別。

１ 實驗部分

１．１ 試劑與儀器

短瓣金蓮花（ＴｒｏｌｌｉｕｓｌｅｄｅｂｏｕｒｉＲｅｉｃｈｂ）藥材購于亳州市 京皖中藥飲片廠（產(chǎn)地：東 北）。石 油 醚（ｂｐ．３０～６０ ℃）、無 水乙醇、９５％乙醇、甲 醇、磷 酸，購 自 天 津 市 北 聯(lián) 精 細 化 學 品開發(fā)有限公司，均為 分 析 純；色 譜 甲 醇，天 津 市 風 船 化 學 試劑科技有限 公 司。純 水 由 Ｍｉｌｌｉ－Ｑ Ｄｉｒｅｃｔ８超 純 水 系 統(tǒng) 產(chǎn) 生。葒草苷（以９７．９％計）、牡荊苷（以９４．９％計）標準品，中 國食品藥品檢定研究院。 Ｎｉｃｏｌｅｔ６７００傅里葉變換紅外光譜儀（美國 ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈ－ ｅｒ）；Ｕ－３０００高效液 相 色 譜 儀（美 國 戴 安）；ＲＥ－５２旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 儀（上海亞榮）；ＳＨＢ－Ⅲ循環(huán)水式真空泵（鞏 義 予 華）；DZF-6090真空干燥箱（上 海 一 恒）；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ Ｄｉｒｅｃｔ８超 純 水 器（美 國 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）；ＰＴＨＷ 型調(diào)溫電熱套（鞏義予華）；ＶＦＤ－１０００ 冷凍干燥機（北京 博 醫(yī) 康）；ＳＫ６２１０ＬＨＣ 雙頻加熱型超聲波 清洗器（上?？茖В?。

１．２ 方法

１．２．１ 樣品制備

將短瓣金蓮花干燥、粉 碎，分 別 稱 取 適 量，采 用 室 溫 浸 提、加熱回流和超聲輔助３種 提 取 工 藝，石 油 醚（ｂ．ｐ．３０～ ６０ ℃）脫脂 后，依 次 分 別 用 １００％，９５％，９０％，…，２０％， １０％甲醇－水和去離子水提取，各３次，提取液過濾、減壓濃 縮并冷凍干燥，得到３６個提取物。

１．２．２ ＨＰＬＣ測定葒草苷和牡荊苷含量

色 譜 柱：ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８４．６× ２５０ｍｍ，５μｍ；流動相：甲醇－０．１％磷酸溶液梯度洗脫，０ ｍｉｎ時甲醇－０．１％磷酸溶液１０∶９０，１７ｍｉｎ時甲醇－０．１％ 磷酸溶液３５∶６５，４０ｍｉｎ時 甲 醇－０．１％磷 酸８０∶２０；流 速 １．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；檢測波長３４０ｎｍ；柱溫為３５℃；進樣量１０ μＬ。 用６０％甲醇配制一系列濃度的混標溶液，葒草苷標準品 溶液的 濃 度 分 別 為 １５０．０，７５．０，３７．５，１８．８ 和 ９．４μｇ· ｍＬ－１，牡荊苷標準品溶液的濃度分別為１７０．０，８５．０，４２．５， ２１．２和１０．６μｇ·ｍＬ－１；用６０％甲醇配制短瓣金蓮花各提 取物的溶液（０．１ｍｇ·ｍＬ－１）。以 上 樣 品 均 用０．４５μｍ 有 機 系濾膜過濾后待用。

１．２．３ 紅外光譜采集

Ｎｉｃｏｌｅｔ６７００傅里葉變換紅外光譜儀輔以水平衰減全反 射（ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌａｔｔｅｎｕａｔｅｄｔｏｔａｌｒｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ，ＨＡＴＲ）附 件，光 譜范圍４０００～６５０ｃｍ－１；ＤＴＧＳ檢測器，分辨率４ｃｍ－１，掃 描次數(shù)６４次，ＯＰＤ速度為０．２ｃｍ－１·ｓ－１，掃描時實時扣除 水和 ＣＯ２ 的干擾。

１．２．４ 紅外光譜方法學考察

１．２．４．１ 精密度試驗

取同一樣品溶 液，用 ＨＡＴＲ 附 件 連 續(xù) 測 定 ５次。采 用 ＯＭＮＩＣ８．２．３８８軟件中譜圖質(zhì)量檢測功能比較５張 紅 外 光 譜圖，譜圖間相關(guān)系數(shù)分別為 ０．９９５６，０．９９８２，０．９９８６， ０．９９８１，１．００００，ＲＳＤ＝０．１６％。

１．２．４．２ 重復(fù)性試驗

同一份樣品，分別取樣５次，用 ＨＡＴＲ附件測定。采用 ＯＭＮＩＣ８．２．３８８軟件中譜圖質(zhì)量檢測功能比較５張 紅 外 光 譜圖，譜圖間關(guān)系數(shù)分別為 １．００００，０．９９６０，０．９９７０， ０．９９８４，０．９９８４，ＲＳＤ＝０．１５％。

１．２．５ 建模方法

采用儀器自帶 ＴＱＡｎａｌｙｓｔＥＺＥｄｉｔｉｏｎ軟件進行建模。根 據(jù) ＨＰＬＣ定量分析葒草苷和牡荊苷的結(jié)果，分別選?。穫€提 取物樣品作為檢驗集，其余為校正集。以交叉驗證相關(guān)系數(shù) （Ｒ２）和交叉驗證誤差均方根（ｒｏｏｔｍｅａｎｓｑｕａｒｅｅｒｒｏｒｏｆｃｒｏｓｓ－ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ＲＭＳＥＣ）為指標比較不同光譜預(yù)處理方法和不同 波段對模型效果的影響，對未知樣本的預(yù)測效果用預(yù)測誤差 均方根（ｒｏｏｔｍｅａｎｓｑｕａｒｅｅｒｒｏｒｏｆｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ＲＭＳＥＰ）考核。

２ 結(jié)果與討論

２．１ 短瓣金蓮花不同提取物的葒草苷和牡荊苷含量

將葒草苷和牡荊苷標準品溶液使用高效液相色譜儀分析 ３次，使用該儀器自帶軟件計算色譜峰積分面積取平均值。 以峰面積為橫 坐 標，濃度為縱坐標繪制標準曲線方程分別 為，牡荊苷：ｙ＝０．１００７ｘ＋０．００９６，Ｒ２＝０．９９９４；葒草苷： ｙ＝０．２００１ｘ－０．３２，Ｒ２＝０．９９９７。 將短瓣金蓮花各提取物采用相同色譜條件進行測試分 析，得到各個葒草苷和牡荊苷含量。

２．２ 定量分析方法和預(yù)處理方法的選擇

首先選擇不 同 的 定 量 分 析 方 法：朗 伯 比 爾 定 律（ｓｉｍｐｌｅ Ｂｅｅｒ’ｓｌａｗ）、偏最小二乘法（ｐａｒｔｉａｌｌｅａｓｔｓｑｕａｒｅｓ，ＰＬＳ）和主 成分回 歸 法（ｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ，ＰＣＲ）；然 后 選 擇不同的光譜預(yù)處理方法：導 數(shù) 處 理（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）、多 元 散 射 校正（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｖｅｓｃａｔｔｅｒｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ，ＭＳＣ）和標準正態(tài)變量 校正（ｓｔａｎｄａｒｄｎｏｒｍａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＳＮＶ）。通 過 篩選不同的定量分析方法和光譜預(yù)處理方法，最終得到了優(yōu) 化的葒草苷和牡荊苷定量分析校正模型，采用ＰＬＳ方法建立 模型，標準正態(tài)分布ＳＮＶ 校正 和 二 階 導 數(shù)（１３點 平 滑）預(yù) 處 理。

２．３ 波段的選擇

ＰＬＳ方法可以選擇全波段范圍作為定量分析區(qū)間，亦可 以選擇部分波段作為定量分析區(qū)間。二 者 各 有 利 弊：全 波 段 范圍可以包含全部的樣品信息，但是所含背景信息也較多，

３ 結(jié) 論 　　

建立了一種利用紅外光譜技術(shù)預(yù)測中藥材指標成分的方 法，從得到的模型可以看出短瓣金蓮花藥材提取物的紅外光 譜與指標成分之間存在很好的相關(guān)性，Ｒ２＞０．９１；且 模 型 預(yù) 測結(jié)果的相對偏差在±５％之 內(nèi)。紅外光譜技術(shù)具有指紋特性強、取樣量小、操作簡便、測試迅速、對環(huán)境無污染、定量 準確等特點。本文只對短瓣金蓮花藥材中的兩種指標成分進 行了預(yù)測。在獲取大量相關(guān)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，該方法可對某種 藥材的多個成分及整體特征甚至藥效、藥理等進行預(yù)測評價，不失為一種很好的中藥材質(zhì)量控制的手段。能 夠 為 中 藥、食品等復(fù)雜體系的化學成分研究提供直接、快 速、有 效 的研究手段，可以縮短研究周期，提高研究效率。



 

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