采 用酶解法水解動物血液制備生物活性肽成為最常用的方 法,具有價格低廉、易轉(zhuǎn)化等優(yōu)點。羊血營養(yǎng)價值豐富,但 目前對水解羊血清蛋白的研究相對較少,特別是利用堿性 蛋白酶法水解羊血清蛋白制備生物活性肽的研究鮮見報 道。本研究采用堿性蛋白酶水解羊血清蛋白,通過測定酶 解溫度、水解時間、水解pH值和加酶量對羊血清蛋白水解 度的影響。721型紫外分光光度計(惠普有限公司)、TGL-16M高 速臺式冷凍離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)、 JA2003N電子天平(上海精密科學儀器有限公司)、HWS28 型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)、PB-10型精 密pH計(Sartorius公司)。
pH值通過影響堿性蛋白酶分子活性部位上相關(guān)基團 解離程度,進而影響酶的作用,在最適pH時,酶分子上 活性基團的解離狀態(tài)與底物結(jié)合最佳,pH 值高于或低于 最適pH時,酶活性基團解離程度降低,影響酶和底物的結(jié) 合能力及酶的反應(yīng)速率。因此,確定堿性蛋白酶水解羊血 清蛋白的最適pH值為11。各響應(yīng)面隨著各個因素增大,羊血 清蛋白的 DH 均呈現(xiàn)先升后降的趨勢,羊血清蛋白的 DH 存在最大值;通過分析各因素之間相互作用對DH的影響, 確定堿性蛋白酶水解羊血清蛋白的最佳范圍。