急性哮喘加重( acute asthma exacerbation，AAE) 通 常由呼吸道病毒感染引起，特別是鼻病毒( ＲV) 。有 研究表明，兒童中 80% ～ 85% 的 AAE 與上呼吸道病 毒感染引起的峰值流量減少和喘息有關(guān)，約 80% 的學(xué) 齡兒童和 50% 的成人在喘息期也檢測(cè)到 ＲV。ＲV 對(duì)過敏性哮喘患者氣道的影響是通過促炎因子和炎性 細(xì)胞因子介導(dǎo)，誘導(dǎo)氣道炎癥過程加重哮喘嚴(yán)重程度 和 AAE。ＲV 感染后哮喘患者氣道內(nèi)炎性細(xì)胞增多 以應(yīng)對(duì)炎癥過程，這些細(xì)胞包括嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。有研究表明，哮喘患者支氣管肺 泡灌洗后數(shù)日內(nèi)白細(xì)胞水平高于健康受試者。此 外，依賴 Th2 和 Th1 的免疫反應(yīng)紊亂可能在哮喘合并 ＲV 患者炎癥過程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。到目前 為止，雖然已有許多關(guān)于呼吸道病毒在兒童急性哮喘 發(fā)作中的作用的研究得到證實(shí)，但對(duì)于 ＲV 誘導(dǎo)的 AAE 患者的炎性反應(yīng)，特別是細(xì)胞因子作用的研究還 很少，本研究描述了 AAE 期間有 ＲV 感染的哮喘兒童 的臨床特征和細(xì)胞因子變化。

1 資料與方法

1． 1 一般資料

以 2016 年 12 月至 2018 年 12 月我 院收治的 ＜ 15 歲 AAE 患兒 115 例為研究對(duì)象，其中男 75 例( 65． 2% ) ，女 40 例( 34． 8% ) ; ＜ 2 歲 24 例 ( 20． 9% ) ，2 ～ 5 歲 52 例 ( 45． 2% ) ，＞ 5 歲 39 例 ( 33． 9% ) 。排除患有較嚴(yán)重疾病( 甲亢、心律失常、先 天性心臟病、風(fēng)濕性心臟病等) 、因其他原因( 心力衰 竭、氣胸、氣道異物阻塞等) 急性發(fā)作的住院的哮喘患 兒或因其他病毒( 呼吸道合胞病毒或流感病毒) 感染 陽性的 AAE 患兒。選擇來本院做健康體檢無任何急 慢性疾病的健康兒童 30 例為對(duì)照組。比較 AAE 患兒 與健康對(duì)照組的臨床特點(diǎn)及細(xì)胞因子水平。本研究經(jīng) 本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者同意參加研究并簽署 知情同意書。

1． 2 ＲV 感染及哮喘嚴(yán)重程度診斷

通過實(shí)時(shí)聚合 酶鏈反應(yīng)( PCＲ) 檢測(cè)鼻咽吸液中鼻病毒。所有兒童在 住院第 1 天均接受鼻咽抽吸，鼻咽吸液是在鼻與耳垂 之間的中段，用一根經(jīng)過消毒的管子經(jīng)鼻進(jìn)入鼻腔收 集。每個(gè)研究對(duì)象吸入 5 ml 鼻咽液。采用 CFX96TM 實(shí)時(shí)系統(tǒng) CC3071( Bio-Ｒad，Hercules，CA，USA) 對(duì)鼻咽 液進(jìn) 行 分 析，診 斷 ＲV 感 染。根據(jù)小兒哮喘評(píng)分 ( PAS) 評(píng)定 AAE 的嚴(yán)重程度。檢查包括呼吸速率、 耗氧量、呼吸肌收縮、聽診、呼吸困難等五部分內(nèi)容，根 據(jù)這些癥狀的嚴(yán)重程度，每一項(xiàng)評(píng)分為 1 ～ 4 分，5 ～ 7 分為輕度哮喘發(fā)作，8 ～ 11 分為中度哮喘發(fā)作，12 ～ 15 分為重度哮喘發(fā)作。

1． 3 外周血細(xì)胞因子定量

細(xì)胞因子定量采用流式 細(xì)胞輔助免 疫 分 析 技 術(shù) 和 Bio-Plex 系 統(tǒng) ( Bio-Ｒad， Hercules，CA，USA) 。使用不含抗凝劑的試管采集2 ml 患者靜脈血樣本，然后直接送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析。將 沒有抗凝血?jiǎng)┑难簶悠分糜谂囵B(yǎng)箱 ( 37℃ ) 中 30 min，然 后 在 1 000 g，4℃ 下 離 心 5 min，然 后 在 10 000 g，4℃下離心 15 min 并準(zhǔn)備冷凍。將所有樣品 儲(chǔ)存在-80℃直至測(cè)試。通過夾心技術(shù)在聚苯乙烯微 球表面上通過免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞因子?；趶囊?知濃度的細(xì)胞因子溫育的微球發(fā)射的熒光密度，使用 Bio-Plex Manager TM 軟件( Bio-Ｒad) 定量研究樣品中 的細(xì)胞因子。對(duì)于每種細(xì)胞因子，用國際細(xì)胞因子標(biāo) 準(zhǔn)建立曲線擬合參數(shù)，并使用主曲線分析免疫測(cè)定 數(shù)據(jù)。

1． 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS 19． 0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資 料以 x珋± s 表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn) 一步兩兩比較采用 LSD 法，計(jì)數(shù)資料組間比較采用列 聯(lián)表 χ2 檢驗(yàn)，P ＜ 0． 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2． 1 哮喘患兒ＲV 感染的臨床及生物學(xué)特征

本研 究共納入了 115 例哮喘兒童，有濕疹 58 例( 50． 4% ) ，有過敏性鼻炎 77 例( 67． 0% ) ，有季節(jié)性變態(tài)反應(yīng) 110 例( 95． 7% ) ; 根據(jù) PAS 評(píng)分有 19 例( 16． 5% ) 患兒為 輕度 哮 喘，38 例 ( 33． 1% ) 患兒為中度哮喘，58 例 ( 50． 4% ) 患兒為重度哮喘。鼻病毒陽性( ＲV + ) 患兒 63 例 ( 54． 8% ) ，鼻 病 毒 陰 性 ( ＲV － ) 患 兒 52 例 ( 45． 2% ) 。ＲV + 哮喘患兒與 ＲV － 哮喘患兒在年齡、 性別、濕疹、過敏性鼻炎、季節(jié)性變態(tài)反應(yīng)、二手煙暴露 等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0． 05) 。2 ～ 5 歲兒童 急性哮喘發(fā)作中 ＲV + 患病率最高，占52． 4% ，＜ 2 歲 兒童急性哮喘發(fā)作中 ＲV + 患病率最低，占 17． 4% 。 ＲV + 哮喘患兒與 ＲV － 哮喘患兒在哮喘評(píng)分、白細(xì)胞 升高、多形核白細(xì)胞升高等方面差異有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P ＜ 0． 05) 。見表 1。

2． 2 ＲV 感染對(duì)哮喘患兒細(xì)胞因子譜的影響

結(jié)果 顯示，非 Th2 相關(guān)細(xì)胞因子 IL-2 在哮喘患兒中無論有 無 ＲV 感染均顯著低于對(duì)照組( P ＜ 0． 05) ，ＲV － 、ＲV + 哮喘患兒 IL-8、IFN-γ 水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0． 05) 。有或無 ＲV 感染的哮喘兒童 TNF-α 水平高于對(duì)照組，而 ＲV-哮喘患兒中 IL-10 水平 高于對(duì)照組和 ＲV + 的哮喘患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義( P ＜ 0． 05) 。ＲV-和 ＲV + 哮喘患兒 Th2 相關(guān)細(xì)胞因 子 GM-CSF 水平與對(duì)照組比較無差異( P ＞ 0． 05) ，但 IL-4 水平與對(duì)照組比較顯著升高( P ＜ 0． 05) 。ＲV + 哮喘患兒 IL-5、IL-13 水平顯著高于 ＲV-和對(duì)照組哮喘 患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0． 05) 。

3 討論

研究表明，大多數(shù)急性哮喘發(fā)作是呼吸道病毒 引發(fā)的，尤其是鼻病毒。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，54． 8% 的 AAE 患兒感染了 ＲV。Hewitt 等研究發(fā)現(xiàn) ＲV 使 急性哮喘發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)增加了 9． 8 倍。此外，在 3 歲以 上的兒童中，與 ＲV 感染相關(guān)的哮喘發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)增加 了 25． 6 倍。Chen 等對(duì) 128 例急性哮喘加重兒童和 192 名健康兒童進(jìn)行了病毒分離，結(jié)果顯示 84． 9% 的 哮喘患兒為 ＲV 陽性，而對(duì)照組為 33% 。這些結(jié)果表 明 ＲV 感染可能是急性哮喘發(fā)作的主要誘因。ＲV 感 染是哮喘急性發(fā)作期間炎癥細(xì)胞增加的主要原因。既 往研究表明，急性哮喘發(fā)作患者痰液細(xì)胞有 ＲV 感染， 多形核白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞明顯增多。本研究 外周血分析顯示 ＲV 感染的 AAE 患兒的多形核白細(xì) 胞顯著增加，與沒有 ＲV 感染的兒童相比，盡管 ＲV + 哮喘患兒嗜酸性粒細(xì)胞增加百分比高于 ＲV-的哮喘患 兒，但沒有顯著性差異。