談飲用水微生物檢測的影響因素

來源：未知發(fā)布日期：2019-04-16 13:55【大中小】

1 談飲用水微生物檢測的影響因素影響因素
1.1 人員
微生物檢測人員應(yīng)具有專業(yè)的知識和技術(shù)能力，并通過培訓(xùn)確保人員檢測能力的持續(xù)。
1.2 環(huán)境
（1）實驗室應(yīng)配置專門用于微生物檢驗的無菌操作間及檢測設(shè)施。實驗前對無菌操作間進行環(huán)境的清理、消毒（如紫外線消毒，作用時間30min,人員需在關(guān)閉紫外燈30min后入內(nèi)作業(yè)）。
（2）環(huán)境無菌評價。對已經(jīng)消毒的環(huán)境進行空白實驗：無菌操作臺在開啟二十分鐘后，四個角落距邊緣5公分的地方及無菌操作臺中心位置放置五個空白培養(yǎng)皿開蓋暴露，嚴(yán)格控制30min后傾注已滅菌冷卻至36℃左右的營養(yǎng)瓊脂，同時對無菌操作間內(nèi)無菌操作臺外的環(huán)境也按照一定間距進行空白實驗。在36℃±1℃下恒溫培養(yǎng)48小時，確認(rèn)平板上的菌落數(shù)，如不符合無菌要求，應(yīng)分析原因并采取適當(dāng)措施。
1.3 設(shè)備
恒溫培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋或干熱滅菌器的溫度應(yīng)定期進行校準(zhǔn)，合格后方可使用，并對其溫度達到平衡的時間以及其運行溫度進行記錄。如使用高壓滅菌鍋，高壓滅菌鍋的壓力也應(yīng)跟溫度同時校準(zhǔn)并記錄。
1.4 藥品配置
培養(yǎng)基通常采用高壓濕熱滅菌個法103kPa，121℃條件下滅菌20min，并按要求調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，培養(yǎng)基如有特殊要求也應(yīng)滿足。
1.5 器具
（1）濕熱滅菌
采用高壓蒸汽滅菌時，需在103kpa，121℃條件下滅菌20min。在高壓滅菌時應(yīng)注意滅菌物品不能擠壓過緊，以免影響蒸汽的流通，使所有物品都能達到徹底滅菌的效果。
（2）干熱滅菌
采用干燥箱滅菌，180℃滅菌1h或160℃滅菌2h。干熱滅菌時時間控制應(yīng)在干燥箱溫度達到設(shè)定溫度并平衡時開始計時。

2 實驗過程
以飲用水中菌落總數(shù)的檢測為例
2.1 設(shè)備:高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱
2.2 主要試劑:營養(yǎng)瓊脂
2.3 實驗用器具
刻度吸管、酒精燈、試管、90mm平皿、試管架等（均經(jīng)高壓滅菌或紫外消毒）
2.4 檢測方法
生活飲用水國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T5750.12–2006中1.1平皿計數(shù)法
2.5 樣品的制備及檢驗
2.5.1樣品的制備
將樣品標(biāo)準(zhǔn)管從冰箱取出，置于無菌室室溫平衡15min。將100mL無菌緩沖液倒入100mL無菌取樣瓶中定量，打開盲樣管，將有顏色的盲樣膠盤在確認(rèn)無破損之后，無菌轉(zhuǎn)移至100mL 無菌緩沖液中，充分震蕩至膠盤完全溶解后靜置，計時十分鐘。得到待檢測盲樣品。
2.5.2樣品的檢驗
檢驗人員進入無菌準(zhǔn)備間，穿戴上已紫外消毒的無菌實驗服、一次性鞋套、滅菌手套（必要時使用75%酒精進行消毒）、口罩后進入操作間，準(zhǔn)備檢測。
2.5.2.1原樣檢測：在已點燃的酒精燈旁，吸取1.00mL待測樣品于培養(yǎng)皿中，待營養(yǎng)瓊脂冷卻至約36℃時，傾注平皿，蓋上平皿后，輕輕晃動平皿，使水樣與營養(yǎng)瓊脂充分混勻。同時做平行樣的測定，做好標(biāo)記。36℃±1℃恒溫培養(yǎng)48h后結(jié)果如圖。

2.5.2.2稀釋：選擇合適的稀釋倍數(shù)，使用0.9%滅菌生理鹽水進行樣品的稀釋，使培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)在合理計數(shù)范圍。
2.5.2.3同時對環(huán)境及瓊脂進行空白實驗。
2.5.2.4操作中應(yīng)注意的事項
（1）實際水樣檢測時，用于微生物檢測的水樣在采集時應(yīng)進行余氯去除，消除余氯對微生物的持續(xù)抑制作用。
（2）操作人員必須有牢固的無菌觀念，整個過程均為無菌操作，盡量靠近火焰，動作迅速，手法規(guī)范。
（3）從樣品的制備到檢測都應(yīng)防止二次污染。如實驗用器具的傳遞。
（4）及時填寫原始記錄，原始記錄應(yīng)如實填寫，并盡可能準(zhǔn)確完整反映檢測過程。

3 討論
微生物檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性要得以保證，需要檢測人員嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度如實報告，注意以上幾個要素的要求，為安全用水提供依據(jù)

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